应用基因工程创制甜瓜坏死斑点病毒的弱毒株系

病毒病是西甜瓜的重要病害，尤其对保护地栽培的西甜瓜危害严重。弱毒株保护是一种防治病毒病侵染的有效方法之一。本项目拟在获得全基因组和构建了侵染性克隆的基础上，运用基因工程手段对基因组进行改造，构建能够系统侵染但不致病的弱毒株系突变体，利用该弱毒株系的保护作用达到防治病害的目的。甜瓜坏死斑点病（Melon necrotic spot virus，MNSV）是一种在中国大陆发现的新病毒病，严重危害甜瓜生产。本研究构建了MNSV的T7启动子的多个全长基因克隆，体外转录物RNA接种甜瓜子叶期幼苗。同时也构建了35S启动子启动的全长克隆的表达载体，利用农杆菌注射的方法进行了多次接种实验。结果证实这两种克隆都不能引起接种苗表现症状，通过RT-PCR和DAS-ELISA都没有检测到病毒cp基因，因此说明该病毒的克隆载体没有侵染性。.该项目增加了计划外的一个内容。中国南瓜曲叶病毒(Squash leaf curl china virus，SLCCNV)也一种甜瓜新病害，2011年在海南三亚的大棚温室内发现，该病毒属于双生病毒科(Geminiviridae)的菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)，具有孪生颗粒形态的植物单链DNA病毒。本项目首次证实了该病毒侵染甜瓜；研究了该病毒的基因组；并成功构建了该病毒的侵染性克隆载体，能成功接种到甜瓜、黄瓜及西瓜等作物，通过PCR和斑点杂交都能检测到该病毒存在于接种后的植株中。