真菌作用HIV-1整合酶靶点的活性成分研究

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AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    30970021
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    36.0万
  • 负责人：
    刘方
  • 依托单位：
    南开大学
  • 学科分类：
    C0101.微生物多样性、分类与系统发育
  • 结题年份：
    2012
  • 批准年份：
    2009
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2010-01-01 至2012-12-31
  • 项目参与者：
    吴子斌； 赵力； 陈荣荣； 江筠； 王常荣； 刘峰； 牛宏江； 陈芝慧； 张聃；
  • 关键词：
    抗氧化真菌HIV-1整合酶

项目摘要

目前抗AIDS药物的研究还主要集中在HIV-1逆转录酶、蛋白酶和整合酶抑制剂的筛选上。逆转录酶抑制剂多为核苷类似物，会因病毒的变异而失效。蛋白酶在生物体内广泛存在，所以抑制HIV-1蛋白酶的药物也对人体有毒副作用。而HIV-1整合酶在生物体内没有同源类似物，因此是很好的抗病毒靶点。本项目以真菌抗氧化物质研究为切入点，用拟建立的抗HIV-1整合酶筛选模型为靶标，从真菌抗氧化物质中筛选出抗HIV-1整合酶的活性成份。在此基础上，利用TNF-a-Luc报告基因小鼠模型和带AIDS病毒LTR-EGFP报告基因的BHK21仓鼠肾细胞系，评价真菌抗氧化物质作用整合酶靶点的活性成份对TNF-a和tat基因表达水平的影响，从而获得能降低NF-κB活性的真菌多效抗AIDS成分，以克服现有专一性酶抑制剂作用单一，抗病毒株一旦出现就完全失效的问题，为天然抗AIDS药物的开发与利用奠定理论基础。

结项摘要

整合酶是HIV-1三大关键酶之一，因其在人体内没有同源类似物，理论上抑制整合酶的药物对人体其它相关酶类影响最小，是很好的抗HIV-1研究的靶点。但至今在32种被FDA批准上市的抗HIV-1药物中只有一种为整合酶抑制剂。其原为目前还未有快速、有效、可以进行大规模药物筛选的整合酶抑制剂检测模型。因此，导致抑制整合酶的药物研究与开发缓慢。 .本研究集中在抗HIV-1整合酶活性成分筛选模型的构建。研究出三个整合酶抑制剂筛选模型：1、整合酶体外切割底物质粒筛选模型，首先通过PCR技术引入F185K和C280S两个突变位点于HIV-1整合酶cDNA片段中，构建出HIV-1整合酶可溶性表达质粒和带有整合酶最适底物LTR序列的质粒，在大肠杆菌中大规模制备纯化整合酶，以便克服已有ELISA检测法成本高、本底高、影响因素多等缺点，可在体外大量而快速的对各种天然或化学合成的整合酶抑制剂进行初步筛选。2、整合酶抑制剂细菌胞内双质粒筛选模型：用pET-IN和pLTR两种质粒共转化大肠杆菌，筛选双抗性、带有双质粒的菌株。通过监测大肠杆菌表达HIV-1整合酶时的生长情况来评价样品对HIV-1整合酶的抑制作用。3、整合酶抑制剂酵母胞内筛选模型：通过酵母中DNA修复蛋白能修复整合酶对酵母基因组的切割，使酵母生长正常；而在RAD52缺陷性菌株中，整合酶对酵母基因组的切割无法修复，菌株的生长明显受抑制。所以，首先用cre/loxp法，定点敲除RAD52基因，再转化进入HIV-1整合酶基因，又建立一种快速、简便的HIV-1整合酶体内筛选模型。这三个模型的构建，使本实验室建立了一套完整、快速、简便的抗HIV-1整合酶抑制剂筛选体系，为以HIV-1整合酶作为靶点筛选和研究抗HIV-1活性成分奠定了基础。.利用以上模型，对干巴菌中筛选出一种多酚类抗氧化成分，分子式为C25H20O12，分子量约为513 Da、对黄伞中筛选出一种没食子酸甲脂抗氧化成分，分子式为C8H8O5，分子量为184.1 Da，进行测定，两个成分都有抗HIV-1整合酶活性。接着对在氧化应激过程中细胞内NF-kB信号激活通路，以及抗氧化成分通过保护作用间接抗HIV-1整合酶机制进行了探讨。双氧水能刺激NF-kB的活化，使抑制蛋白降解。而抗氧化成分能抑制NF-kB p65活化和防止IkB降解，抑制氧化应激，从而间接达到抗HIV-1整合酶作用。

项目成果

期刊论文数量（6）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
First isolation of tryptophan from edible lotus (Nelumbo nucifera Gaertn) rhizomes and demonstration of its antioxidant effects
首次从食用莲 (Nelumbo nucifera Gaertn) 根茎中分离色氨酸并展示其抗氧化作用
  • DOI：
    10.3109/09637480903427913
  • 发表时间：
    2010-06-01
  • 期刊：
    INTERNATIONAL JOURNAL OF FOOD SCIENCES AND NUTRITION
  • 影响因子：
    3.9
  • 作者：
    Jiang, Y.;Ng, T. B.;Liu, F.
  • 通讯作者：
    Liu, F.
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从北虫草子实体中分离具有抗氧化和 HIV-1 蛋白酶抑制活性的腺苷、奥香素和二甲基鸟苷
  • DOI：
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  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    Phytomedicine
  • 影响因子：
    7.9
  • 作者：
    Jiang Yun;Liu Fang;Wong Jack Ho;Fu Ming;Ng Tzi Bun;Liu Zhaokun;Wang Changrong;Li Ning;Qiao Wentao;Wen Tingyi
  • 通讯作者：
    Wen Tingyi
莲藕抗氧化多糖的抗HIV-1整合酶作用研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    南开大学学报(自然科学版)
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    江筠;王常荣;李宁;陈芝慧;张聃;吕鹏云;曲丽媛;乔文涛;刘方
  • 通讯作者：
    刘方
Immunoregulatory and anti-HIV-1 enzyme activities of antioxidants components from lotus (Nelumbo nucifera Gaertn) rhizome
莲 (Nelumbo nucifera Gaertn) 根茎抗氧化剂成分的免疫调节和抗 HIV-1 酶活性
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    Bioscience Reports: Molecular and Cellular Biology of the Cell Surface
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    Jiang Yun;Ng Tzi Bun;Liu Zhaokun;Wang Changrong;Li Ning;Qiao Wentao;Liu Fang
  • 通讯作者：
    Liu Fang
Isolation of a polysaccharide with antiproliferative, hypoglycemic, antioxidant and HIV-1 reverse transcriptase inhibitory activities from the fruit bodies of Pleurotus abalonus
从鲍鱼子实体中分离具有抗增殖、降血糖、抗氧化和HIV-1逆转录酶抑制活性的多糖
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    Journal of Pharmacy and Pharmacology
  • 影响因子：
    3.3
  • 作者：
    Wang Changrong;Ng Tzi Bun;Li Le;Fang Jincen;Jiang Yun;Wen Tingyi;Qiao Wentao;Li Ning;Liu Fang
  • 通讯作者：
    Liu Fang

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AI项目解读示例

课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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