65kDaAIF新片段在外源性氧化应激损伤(H2O2)诱导视网膜神经节细胞凋亡机制中的作用

65kDaAIF是我们在研究外源性氧化应激损伤(H2O2)诱导视网膜神经节细胞凋亡的分子机制中发现的新蛋白片段。根据实验结果和理论依据我们分析后提出假说：在H2O2诱导的RGC-5细胞凋亡中，可能存在着非Caspase依赖、非经线粒体的新凋亡信号途径，即胞浆中AIF前体直接被Calpain酶切后形成65kDaAIF,并转运至细胞核诱导细胞凋亡。本课题将从以下三方面来论证该实验假说①利用肽指纹图谱验证65kDaAIF同源性并测定末端序列及酶切位点②检测细胞内Calpain活性并体外证实Calpain酶切AIF的关系③应用Western Blot等实验确认65kDaAIF的核转位，并利用siRNA干扰技术证实其诱导细胞凋亡的生物功能。该假说的验证将是对细胞凋亡信号途径的新补充；另外对视网膜神经节细胞凋亡信号机制的研究将为开发新的神经保护药物提供有力的实验基础和理论依据。