5HRE与CEAp联合调控抑癌基因RASSF1A系统治疗CEA阳性肿瘤的基础研究
结题报告
批准号:
81172362
项目类别:
面上项目
资助金额:
60.0 万元
负责人:
孙学军
依托单位:
学科分类:
H1802.肿瘤发生
结题年份:
2015
批准年份:
2011
项目状态:
已结题
项目参与者:
王炜、郑见宝、刘栋、张仕运、任海亮、王伟、倪磊、石景森
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中文摘要
消化道恶性肿瘤是严重威胁人类健康的重大疾病,针对恶性肿瘤的基因治疗越来越受到重视。本研究在课题组已有研究的基础上,利用人VEGF基因5'-端缺氧反应元件(HRE),与癌胚抗原启动子(CEAp)基因重组,构建缺氧可诱导的CEA阳性肿瘤特异性的基因转录调控元件,用该元件调控抑癌基因RASSF1A的表达,并以逆转录病毒载体pLEGFP作为工程载体,构建成能将抑癌基因RASSF1A在CEA阳性肿瘤细胞内表达的逆转录病毒表达载体,进一步在体内外观察该治疗系统的抗肿瘤活性。本基因治疗载体具有较高的靶向性与特异性,能高效的发挥抗肿瘤作用。本课题突破了传统的肿瘤瘤苗研究思路,结合了肿瘤缺氧微环境、CEA启动子调控与抑癌基因抗肿瘤研究的成果,在基因转录水平靶向性地调控抑癌基因RASSF1A的表达,符合肿瘤疫苗设计的基本要求,为治疗CEA阳性肿瘤探索新的途径。
英文摘要
胃癌是消化系常见的恶性肿瘤,严重威胁人类的健康,基因治疗是充满希望的治疗胃癌有效手段。本课题研究重组慢病毒介导的抑癌基因RASSF1 A载体LV-5HRE-CEAp-RASSF1A在体外、体内对低氧条件下CEA阳性的人胃癌细胞株SGC7901的抑制作用。为胃癌的基因治疗探索新的方法。通过qRT-PCR法、细胞免疫组织化学方法(SP)及Western blot法检测细胞CEA及RASSF1A表达水平,从而筛选出实验组细胞及阴性对照细胞;通过分子克隆技术构建慢病毒表达载体LV-5HRE-CEAp-RASSF1A,双萤光素酶报告基因载体,采用双萤光素酶报告基因载体实验及体外调控RASSF1A表达实验检测调控序列5HRE-CEAp的靶向性;通过体内及体外实验检测LV-5HRE-CEAp-RASSF1A对胃癌细胞的抑制作用;通过Western blot法探索其抑制SGC7901的分子机制。结果表明:1)成功构建低氧诱导的靶向CEA转录阳性肿瘤的慢病毒载体LV-5HRE-CEAp- RASSF1A;2)双萤光素酶报告基因载体实验及体外调控RASSF1A表达实验证实5HRE-CEAp具有靶向低氧及CEA转录阳性胃癌细胞的双靶向特异性;3)体外实验表明慢病毒载体LV-5HRE-CEAp-RASSF1A低氧环境中通过抑制细胞增殖生长、促进凋亡、抑制细胞周期停止在G1期、抑制细胞克隆形成、抑制细胞侵袭转移等多个方面来抑制CEA转录阳性胃癌细胞SGC7901的恶性表型;4)体内实验表明慢病毒载体LV-5HRE-CEAp-RASSF1A能够能够在裸鼠胃癌移植瘤中长期表达RASSF1A并抑制裸鼠胃癌移植瘤的生长;5)慢病毒载体LV-5HRE-CEAp-RASSF1A抑制胃癌细胞的机制可能为低氧环境下在CEA转录阳性胃癌细胞中高表达RASSF1A蛋白,进而促进Caspase3蛋白表达,进而促进凋亡;抑制MMP2蛋白表达,进而抑制肿瘤细胞的侵袭转移;抑制CyclinD1蛋白的表达,进而减慢细胞周期。本研究构建的慢病毒载体在体内体外实验中初步展现了低氧诱导及靶向CEA转录阳性胃癌细胞的特点。为LV-5HRE-CEAp-RASSF1A临床应用奠定实验基础。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
DOI:--
发表时间:2014
期刊:中国普通外科杂志
影响因子:--
作者:孙学军;郑见宝;陈南征;任燕飞;Rajendra Gurung;魏光兵;张立;姚建峰;尉春艳
通讯作者:尉春艳
DOI:10.1038/gt.2015.49
发表时间:2015-10
期刊:Gene therapy
影响因子:5.1
作者:Zhou PH;Zheng JB;Wei GB;Wang XL;Wang W;Chen NZ;Yu JH;Yao JF;Wang H;Lu SY;Sun XJ
通讯作者:Sun XJ
DOI:--
发表时间:2014
期刊:中国肿瘤生物治疗杂志
影响因子:--
作者:王晖;姚建锋;张立;贾蓬勃
通讯作者:贾蓬勃
DOI:--
发表时间:2013
期刊:中国普外基础与临床杂志
影响因子:--
作者:姚建峰;张立;禄韶英;杜俊凯
通讯作者:杜俊凯
Overexpression of caudal-related homeobox transcription factor 2 inhibits the growth of transplanted colorectal tumors in nude mice.
尾部相关同源盒转录因子2的过度表达抑制裸鼠移植性结直肠肿瘤的生长
DOI:10.3892/mmr.2015.3838
发表时间:2015-09
期刊:Molecular medicine reports
影响因子:3.4
作者:Zheng JB;Qiao LN;Sun XJ;Qi J;Ren HL;Wei GB;Zhou PH;Yao JF;Zhang L;Jia PB
通讯作者:Jia PB
CDX2/MMP1/Collagen-I正反馈通路介导的细胞外基质重构在结直肠癌侵袭转移中的作用机制研究
  • 批准号:
    81972720
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    55.0万元
  • 批准年份:
    2019
  • 负责人:
    孙学军
  • 依托单位:
缺氧诱导型超抗原治疗CEA阳性肿瘤的基础研究
  • 批准号:
    30672070
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    27.0万元
  • 批准年份:
    2006
  • 负责人:
    孙学军
  • 依托单位:
国内基金
海外基金