Artemis相关的检测点恢复通路在癌基因Ras诱导的细胞癌变过程中的作用研究

细胞周期检测点是细胞癌变过程中的重要关卡，在细胞应对癌基因激活压力时检测点恢复通路的作用未有报道。本课题通过体外细胞实验研究Artemis检测点恢复相关蛋白的功能及其在应对细胞癌变压力中的作用。在发生癌变的肿瘤组织中可以检测到多个细胞周期检测点蛋白的激活表达，部分检测点恢复通路蛋白在肿瘤组织中高表达，Artemis蛋白的表达水平在乳腺癌和癌旁正常组织的表达无明显差异。本研究建立了Ras癌基因激活诱导的DNA损伤检测点激活细胞模型。发现Artemis基因表达敲低可能仅能使原代成纤维细胞衰老加速，而对已经发生癌变的肿瘤细胞，Artemis基因表达敲低并不能加速细胞的衰老。Artemis蛋白表达敲低引发P53蛋白的稳定性增加，可能是Artemis 基因表达敲低促进Ras激活诱发细胞发生衰老的机制。DNA-PKcs蛋白和Artemis蛋白组成一个共调节复合体，共同调控P53蛋白表达水平，而Artemis表达水平和磷酸化并不会对DNA损伤检测点蛋白Chk1，Chk2和H2AX的磷酸化产生影响。在有丝分裂抑制药物作用实验中，我们发现Artemis表达敲低细胞对Paclitaxel的作用敏感性增加，Artemis促进Nocodazole引起的G2/M检测点的细胞周期恢复过程。在检测点恢复蛋白调控机制实验研究中发现Artemis表达敲低细胞和Artemis S516-645A突变细胞中的Claspin蛋白的表达降低，推测Artemis可能是通过影响泛素蛋白降解系统而影响Claspin蛋白的稳定性。本研究结果对细胞癌变过程提出了新的研究思路，并对细胞周期检测点恢复通路蛋白的功能做了延伸研究。