外源性甲酰肽受体FPR干扰剂- - 原花青素低聚体F2抗胶质瘤的作用与机理研究

甲酰肽受体（FPR）是一种G蛋白偶联受体，选择性表达于人恶性胶质瘤细胞系U-87该受体可以通过与激动剂（由坏死的胶质瘤细胞释放的）作用，介导人恶性胶质瘤细胞的迁移、存活、生长及血管生成。因此，FPR可以作为一个开发新型抗胶质瘤药物的分子靶点。F2为葡萄籽来源的聚合度为2-15的原花青素低聚体混合物，能显著抑制U-87细胞（高表达FPR）的增殖、趋化和钙动员，提示F2或其组分可能是FPR的外源性的干扰剂。.本研究采用流式细胞术、趋化性实验、siRNA干扰技术、免疫荧光实验、RT-PCR、Western Blot等多种技术手段，.（1）首次筛选出具有较好抗胶质瘤活性的葡萄籽提取物原花青素低聚体F2。F2不仅对肿瘤细胞有强杀伤作用，而且在非细胞毒浓度能显著抑制fMLF诱导的U-87细胞趋化。.（2）F2能诱导人恶性胶质瘤细胞系U-87发生paraptosis样细胞死亡，且活性氧是介导F2细胞毒作用的重要机制；.（3）F2是FPR的部分激动剂，可以激活FPR，但当它与完全激动剂甲酰肽(fMLF)联用时，它可以拮抗fMLF的效应；.（4）在体外，F2能和抑制U-87细胞存活和血管生成。其机制为F2通过抑制FPR介导的表皮生长因子受体（EGFR）的转活和PI3K-Akt信号通路，影响了其下游蛋白Bcl-2/Bax、HIF-1α（缺氧诱导因子1-α）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达；.（5）构建起人恶性胶质瘤U-87细胞移植瘤裸鼠模型，考察F2对恶性胶质瘤的作用，发现F2（50和200mg/kg）可以显著抑制恶性胶质瘤的生长，抑瘤率分别为46.92%和 53.26%。其作用机制为F2可以降低肿瘤组织中FPR的表达，抑制EGFR和PI3K-Akt信号通路的活化，影响了Bcl-2/Bax、HIF-1α和VEGF的表达。.（6）F2为原花青素低聚体的混合物，对F2进行了合理的分离纯化，筛选出了其中活性较强的组分，并对其进行二维分离纯化。.上述结果证明了我们提出的“F2是FPR外源性干扰剂”的假设，并为恶性胶质瘤的治疗提供了一个新方法和思路。综上，本项目基本完成了的预定的实验内容，已发表SCI收载文章2篇，国内核心期刊1篇，主办中美神经免疫与肿瘤药理学术研讨会，发表国际会议大会报告3篇，国内会议分会报告1篇，培养研究生6名，取得了预期的结果。