组蛋白赖氨酸甲基转移酶EZH2 是表观遗传调控因子PcG 蛋白的核心成分。本项目前期研究结果表明EZH2可能通过作用减数分裂前生殖细胞特异基因Stra8（Stimulated by retinoic acid gene 8）调控小鼠诱导多能干细胞(mouse induced pluripotent stem cells, miPS)分化。因此，我们进一步对EZH2在miPS分化中的调控机制进行了初步研究，研究结果显示：⑴ 将小鼠iPS细胞系miPS(IP14D-1)通过悬浮培养分化形成拟胚体(iEBs)作为向生殖细胞分化的启动步骤，1µmol/L全反式维甲酸(atRA)持续诱导iEBs 2、4和7d。与不添加RA 培养的iEBs相比，处理后iEBs的形态无明显变化。⑵ RT-PCR检测IP14D-1细胞及不同时间iEBs的生殖细胞分化相关基因表达，发现IP14D-1及相应的iEB均表达EZH2和Stra8。⑶ 根据RT-PCR结果，采用免疫荧光方法检测EZH2和Stra8在未分化IP14D-1及RA诱导的不同时间iEBs中的表达情况。发现stra8阳性信号均定位在胞浆中，而EZH2定位于胞膜上，Stra8阳性信号相对强于EZH2，与RT-PCR结果相一致。⑷ 采用实时荧光定量RT-PCR（Real-time RT- PCR）检测EBs 中EZH2和Stra8的表达水平，结果表明，在细胞分化过程中伴随EZH2表达下降，PGC分化的特征性基因Stra8表达上调。⑸ 进一步采用Western blot检测EZH2-siRNA对Stra8蛋白表达的影响：将分别EZH2-siRNA转染RA诱导后2d和4d的iEBs， EZH2-siRNA转染iEBs后, Stra8的蛋白表达水平显著升高。 ⑹ 初步探讨iEB中EZH2和Stra8之间的相互作用：以4d的iEBs为研究对象，裂解后获得来自iEBs的总蛋白，采用兔抗单克隆抗体EZH2、兔抗多克隆抗体Stra8和正常对照兔IgG，然后进行免疫共沉淀，确定EZH2和Stra8是否相互作用。结果显示在4d的iEBs中，EZH2和Stra8发生相互作用。结论：本研究初步探明了EZH2及其下游靶基因Stra8在atRA(全反式视黄酸)诱导的小鼠iPS细胞系分化过程中的表达及定位，并证明了EZH2和Stra8存在相互作用，研究成果将可能为进