研究发现RA患者血清中特异性抗瓜氨酸化蛋白抗体与RA病情严重程度、关节软骨侵蚀相关，并且关节滑膜组织中存在PADI4异常高表达及大量瓜氨酸化蛋白沉积，表明蛋白瓜氨酸化可能是RA发生、发展的重要分子机制。本项目以RA关节滑膜成纤维细胞（RA-FLS）为主要研究对象，探讨RA-FLS细胞内、外蛋白异常瓜氨酸化对FLS增生、凋亡的影响。主要完成了以下研究内容：.1）研究瓜氨酸化波形蛋白(cVim)诱导RA及正常人外周血PBMCs来源的未成熟树突细胞（imDCs）成熟分化及分泌炎症因子的能力。研究首次发现cVim能够诱导正常人及RA患者外周血来源的imDCs成熟、促进分泌炎症因子、增强T淋巴细胞免疫反应。.2）分析瓜氨酸化纤维连接蛋白（cFn）和 cVim对分离培养的RA-FLSs、OA-FLSs细胞增生、凋亡及分泌炎症因子的影响。免疫组化和荧光双标记技术发现与OA相比，RA关节滑膜组织中存在大量瓜氨酸化蛋白沉积，其中cFn为特异性沉积的瓜氨酸化蛋白；cVim能有效地促进RA-FLSs增殖、促进PADI4、RANKL和TNF-α、IL-1等在RA发病机制中起重要作用的炎症因子表达；发现 cFn能显著抑制RA、OA来源的FLSs细胞凋亡、促进TNF-α和IL-1表达。上述发现揭示了RA关节滑膜局部瓜氨酸化蛋白异常沉积是关节滑膜慢性炎症、异常增生的直接诱因。.3）采用PADI4 表达载体及siRNA技术干扰FLS细胞内PADI4表达，观察FLS增生、凋亡表化及可能的分子机制。研究发现， siRNA抑制PADI4表达后RA-FLS凋亡显著增加伴随细胞p53、p21表达增加，同时瓜氨酸化组蛋白H3（cit-H3）也减少、甲基化H3增多；将PADI4表达载体转入RA-FLS，则出现与上述相反情况，细胞凋亡减少，p53、p21表达受抑制，瓜氨酸化组蛋白H3（cit-H3）显著增多。从细胞水平证实了PADI4通过组蛋白甲基化/瓜氨酸化修饰途径调节p53、P21等因子表达来调控FLS细胞凋亡。.4）采用蛋白质谱技术筛选、鉴定了RA-FLS、OA-FLSs差异表达蛋白，并鉴定出三个与 RA-FLSs生存/凋亡失平衡相关的关键分子，人异天冬氨酰甲基转移酶（PIMT）、硫氧还蛋白1（Pirin）和TRX-1表达异常；.5）研制具有自主知识产权的抗环状瓜氨酸短肽（CCP）抗体ELISA检测试剂，并