利用改良型cDNA-AFLP技术筛选木薯抗旱相关基因
结题报告
批准号:
31000537
项目类别:
青年科学基金项目
资助金额:
17.0 万元
负责人:
陈新
学科分类:
C0602.基因表达及非编码序列调控
结题年份:
2013
批准年份:
2010
项目状态:
已结题
项目参与者:
曾长英、夏志强、宋顺、漆雪琳
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中文摘要
木薯(Manihot esculenta Crantz)是世界三大薯类作物之一和我国发展燃料乙醇的重要原料。木薯抗旱能力突出,具备独特的抗旱调节机制,但木薯抗旱的机理尚未阐明。cDNA-AFLP是一种经济且高通量的筛选差异表达基因的实验技术,本研究提出的改良型cDNA-AFLP技术将解决其转录获得片段(Transcript-derived fragment,TDF)不能达转录起始位点的不足,使其TDF将多始于转录起始位点,包含5'UTR,且可方便地获得基因的全长cDNA。本研究将建立改良型cDNA-AFLP技术体系,并利用该技术筛选木薯品种间不同干旱胁迫处理样品的差异表达TDF。进而,对干旱诱导表达的TDF进行克隆,功能注释和时空表达验证,并克隆10-20个木薯抗旱相关基因的全长cDNA,为后续的功能验证和木薯抗旱机理的研究奠定基础。
英文摘要
本研究以干旱胁迫处理木薯叶片为媒介,建立和优化了改良型cDNA-AFLP技术体系,并利用改良型技术筛选到约100个在干旱胁迫处理下发生差异表达的木薯转录获得片段(Transcript Derived Fragment, TDF),并对其中68个TDF进行了克隆、测序和功能注释。研究结果表明,改良型技术的关键步骤已经完成,MmeI内切酶的识别位点已经整合到双链cDNA中,而且改良型技术所获得的TDF明显更加靠近转录起始位点。此外,通过采用qRT-PCR技术进行验证,表明多数差异表达TDF确实在干旱胁迫下显著地上调或下调,而且部分差异表达TDF的同源基因为已报道的抗旱或抗旱相关基因。总的来说,改良型cDNA-AFLP技术体系已初步建立且尚需完善,差异表达TDF所含的信息还需进一步挖掘以服务于木薯抗旱遗传改良。
期刊论文列表
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DOI:--
发表时间:2013
期刊:热带作物学报
影响因子:--
作者:王宇阳;陈新等
通讯作者:陈新等
DOI:--
发表时间:2011
期刊:中国农学通报
影响因子:--
作者:漆雪琳;李博;宋顺;陈新;彭明
通讯作者:彭明
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