从卵细胞再生研究肾主骨生髓、主生殖的关联及归肾丸防治卵巢早衰的机制

本项目构建卵巢早衰动物模型，应用分子生物学、免疫组织化学、流式细胞技术及形态学定量方法等技术，观察模型小鼠外周血常规、FSH、LH、雌、孕激素，卵巢局部AMH、GDF-9、BMP-15等细胞因子的变化，同时，对小鼠骨髓、卵巢及其细胞的形态、类别和功能进行判定，明确骨髓、卵巢间的内在关系，并以归肾丸进行干预，探讨补肾养血法则对模型小鼠的骨髓造血机能、卵巢储备功能的影响，并对其内在关系进行阐释。. 实验结果显示：归肾丸可以一定程度上改善卵巢早衰模型小鼠的卵巢功能。其表现为：该方可以修复造模引起的卵巢形态学损伤、提高子代小鼠的健康状况、调节机体激素水平、增加卵巢储备。其机制为：第一，该方可以调节生殖干细胞标志物DDX4以及OCT4在骨髓及卵巢中表达，从而改善生殖干细胞功能，通过卵细胞再生从来源上增加卵巢储备。第二，该方调节卵巢局部卵泡调控因子AMH、BMP15、GDF9的表达，调控卵巢颗粒细胞凋亡相关因子Bax、Caspase3、Bcl-2的表达；同时提高外周血及卵巢局部的免疫功能。总之，归肾丸可能通过改善骨髓干细胞的分化，改善卵巢局部的微环境的途径改善卵巢早衰模型小鼠的卵巢功能，部分验证了本课题提出的“肾主骨、生髓与肾主生殖有内在的联系，补肾养血可能通过骨髓促进卵巢卵母细胞再生，改善生殖功能”的工作假说。