WT1-Id1通路在乳腺癌侵袭转移中的作用及机制研究

WT1可能在乳腺癌中发挥癌基因功能，但其在乳腺癌组织中表达的临床意义尚不明确，其在乳腺癌进展中的具体作用和分子机制至今尚不清楚。针对上述问题，本研究开展了系列临床及基础研究，发现WT1在组织学分级高、ER阴性、Basal-like型及HER-2过表达型的乳腺癌患者中表达水平明显升高；多变量分析显示WT1是乳腺癌患者的独立预后不良因素。同时，发现WT1单核甘酸多态性rs16754、rs5030320以及rs5030317的突变基因型与WT1 mRNA低表达有关、并可导致乳腺癌发病风险降低。WT1在MDA-MB-321中的表达水平明显高于其在MCF-7、Bcap-37和SKBR-3中的表达水平，遂以MDA-MB-231作为RNAi细胞模型、以MCF-7作为RNAa细胞模型。成功构建三个WT1 siRNA并转染到MDA-MB-231细胞中，均能够有效抑制WT1 mRNA和蛋白的表达，以转染48h时WT1 siRNA-1029的效果最为显著。使用WT1 siRNA-1029转染MDA-MB-231细胞、干扰其WT1表达后，细胞的增殖能力下降，同时早期、晚期凋亡细胞和G1期细胞比例增加，S期和G2期细胞比例降低，细胞的侵袭及迁移能力降低；干扰WT1可下调Id1蛋白的表达水平并使细胞的侵袭迁移能力下降，并可导致Id1的启动子活性降低。此外，利用生物信息学发现WT1与Id1在乳腺癌组织中的表达存在正相关关系，且WT1可与Id1的启动子结合。将WT1 dsRNA-319转染到MCF-7细胞中，在50μmol/L、转染96h时WT1 dsRNA-319对MCF-7细胞WT1的过表达作用最为显著，且这一过程伴随MCF-7细胞增殖、侵袭及迁移能力的增高。此外，我们使用TGF-β1（浓度：10ng/ml，作用时间：48h）诱导MCF-7细胞，发现加入TGF-β1可使乳腺癌MCF-7细胞由上皮细胞样形态转变为间质细胞样形态，这一过程伴随WT1 mRNA和蛋白表达水平的显著升高，同时还可使MCF-7细胞的侵袭及迁移能力明显增高。上述结果提示：WT1在乳腺癌中发挥癌基因样功能，可通过转录调控Id1的表达，增强乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力，导致乳腺癌恶性程度增加；证实WT1可促进乳腺癌的进展，并初步揭示了其参与上述过程的上下游分子机制，有助于进一步加深对乳腺癌侵袭转移机制的认识。