采用小RNA干扰神经元DYT1和SGCE基因表达探讨其致肌张力障碍机制与囊泡蛋白、细胞骨架及离子通道的关系

分子遗传学的进展，发现了DYT1 和Epsilon-sarcoglycan（SGCE）基因突变引起不同临床类型的肌张力障碍，但其机制目前尚不清楚。本课题目的旨在探讨DYT1 和SGCE基因在肌张力障碍发病中可能的作用机制。本研究拟采用离体培养多部位的小鼠神经元（纹状体投射神经元、大脑皮质锥体细胞、小脑颗粒细胞、海马锥体细胞），应用小干扰RNA技术（siRNA）分别抑制DYT1，SGCE 及DYT1/ SGCE 基因在神经元中的表达，在显微镜下观察神经元的生长情况、轴突长度及形态学变化，采用免疫细胞化学技术、Western blot方法检测囊泡标志蛋白、细胞骨架成分，比较抑制前后的异同；采用膜片钳技术，检测抑制前后神经元膜跨膜电位、离子电流的变化，探讨细胞膜钠、钙单通道变化及其相互关系，在基因和分子水平上结合电生理来探讨DYT1 和SGCE基因在肌张力障碍的发病中意义，为新药开发提供依据。