miR-9/211/142-3p在大鼠BTB周期性变化和精子发生中的功能研究

批准号:
81370756
项目类别:
面上项目
资助金额:
70.0 万元
负责人:
宿文辉
依托单位:
学科分类:
H0405.精子发生异常与男性不育
结题年份:
2017
批准年份:
2013
项目状态:
已结题
项目参与者:
王国丽、赵国杰、郭昆峰、卢发太、崔璀、熊晓川、谭跃龙、刘素媛、孟晓娜
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中文摘要
哺乳动物生精上皮周期性变化与血睾屏障功能的维持和精子发生过程密切相关。申请者前期研究发现miR-9/211/142-3p在大鼠睾丸中的表达具有生精周期依赖性,通过生物信息学软件预测其靶基因为Scrib极性蛋白复合体。基于Scrib复合体蛋白在调节上皮细胞功能中发挥的重要作用,申请者拟通过实验手段验证miR-9/211/142-3p在血睾屏障中对Scrib复合体蛋白的表达调节;在此基础上,通过在体外培养的SC(支持细胞)或SC-GC(生殖细胞)共培养中干预miR-9/211/142-3p的表达,检测其对SC上皮通透性及SC-GC粘附力的影响;并拟在精子释放异常动物模型中,结合体内BTB完整性检测,证实miR-9/211/142-3p可以通过调节Scrib复合体的表达影响生精上皮的周期性进程和精子释放过程,为进一步阐明血睾屏障周期性变化及精子发生的分子机理提供新的思路和实验基础。
英文摘要
In mammals, the periodocal change of the seminiferous epithelium is closely related with the function of BTB and spermatogenesis. In th e preliminary work, the applicant found that miR-9/211/142-3p had seminiferous cycle- dependent expressions in rat testis, the target genes of which were predicted to be Scrib polarity complex by bioinformatics softwares. Due to the important role of Scrib complex in regulation of epithelial function, the expression regulation of Scrib complex by miR-9/211/142-3p will be tested by biological techniques. After that, the Sertoli cell(SC) epithelial permeability and the adhesion between SC and germ cell(GC) will be examined after intervening the expression of miR-9/211/142-3p in cultured SC or SC-GC co-cultured in vitro. Furthermore, the abnormal-spermiation amimal model and BTB integrity assay in vivo will be used to prove the role of miR-9/211/142-3p in seminiferous epithelial cycle and spermiation by regulating the expression of Scrib complex. This study will provide novel thoughts and experimental basis for further clarifying the molecular mechanism(s) of BTB dynamics and spermatogenesis.
我们在前期研究中通过LCM采集大鼠不同期别生精上皮组分,经基因芯片分析发现miR-9/-211/-142-3p的表达具有生精周期依赖性,通过生物信息学软件预测其靶基因为Scribble/Dlg1/Lgl2极性蛋白复合体。在本项目中,我们发现该3种miRNA在VII-VIII期大鼠生精上皮的表达明显降低,并通过实验手段验证了其靶基因。通过在体外培养SC及大鼠睾丸内转染该3种miRNA,我们发现miR-142-3p可明显增强BTB屏障功能,而miR-9/-211对BTB功能无显著影响。TNFα及TGF-β3是BTB周期性动态变化的主要调节因子,在深入研究miR-142-3p对BTB调节机制的过程中,我们揭示了TNFα通过下调SC的miR-142-3p水平影响连接蛋白occludin、claudin-11及F-actin骨架的分布,以及上调MMP-9活性,进而破坏BTB功能;随后,我们还发现miR-142-3p与TGF-β3在生精上皮中具有完全相反的变化趋势,并证明了miR-142-3p通过靶向调节Lgl2及抑制Cdc42的GTPase活性,拮抗TGF-β3对BTB的损伤作用。此外,我们还证明了miR-211及miR-142-3p均可促进体外SC-GC间细胞连接的形成,大鼠睾丸内抑制miR-211或miR-142-3p可引起顶端ES连接处laminin γ3表达降低,影响体内精子发生过程。非编码RNA的功能研究在BTB中较少见,以上研究成果在BTB周期性重构及精子发生的分子机制研究中均为首次发现,为进一步阐明BTB周期性变化及精子发生的机理提供了新的思路和实验基础。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
DOI:--
发表时间:2015
期刊:中国实验动物学报
影响因子:--
作者:宿文辉;贾晓宇;孟晓娜
通讯作者:孟晓娜
DOI:--
发表时间:2014
期刊:生殖与避孕
影响因子:--
作者:宿文辉;孟晓娜;吕孟竹
通讯作者:吕孟竹
MiR-142-3p inhibits TGF-β3-induced blood-testis barrier impairment by targeting lethal giant larvae homolog 2
MiR-142-3p 通过靶向致命巨型幼虫同源物 2 抑制 TGF-β3 诱导的血睾屏障损伤
DOI:--
发表时间:--
期刊:Cellular Physiology and Biochemistry
影响因子:--
作者:Ying Xu;Weixing Wu;Yunxia Fan;Shuyi Jiang;Xiaoyu Jia;Wenhui Su
通讯作者:Wenhui Su
DOI:--
发表时间:2016
期刊:生殖与避孕
影响因子:--
作者:王玥;孟晓娜;贾晓宇;张丽雁;宿文辉
通讯作者:宿文辉
DOI:--
发表时间:2014
期刊:生命科学研究
影响因子:--
作者:宿文辉;孟晓娜;贾晓宇
通讯作者:贾晓宇
IV型胶原蛋白-NC1结构域多肽通过Cdc42 GTPase影响血睾屏障功能及精子发生的机制研究
- 批准号:81971442
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:55.0万元
- 批准年份:2019
- 负责人:宿文辉
- 依托单位:
Rab13 GTPase对血睾屏障紧密连接的调节
- 批准号:81100462
- 项目类别:青年科学基金项目
- 资助金额:22.0万元
- 批准年份:2011
- 负责人:宿文辉
- 依托单位:
国内基金
海外基金
