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家蚕BmMLs和BmToll9响应LPS引发免疫和自噬的研究
结题报告
批准号:
31101765
项目类别:
青年科学基金项目
资助金额:
23.0 万元
负责人:
杨婉莹
依托单位:
学科分类:
C1709.养蚕学
结题年份:
2014
批准年份:
2011
项目状态:
已结题
项目参与者:
温硕洋、许俊峰、叶慧、程玉、刘洋、贾浩伟
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中文摘要
脂多糖(LPS)可以通过TOLL途径诱发哺乳动物的免疫反应和细胞自噬,但不能诱导双翅目昆虫果蝇抗菌肽的表达。最近研究发现LPS可以诱导鳞翅目昆虫家蚕抗菌肽的表达,说明家蚕对LPS的免疫反应通路与果蝇的TOLL和IMD信号通路不同。我们前期研究发现,LPS可以诱导家蚕受体蛋白BmMLs和抗菌肽Glov1高表达,结构功能分析也提示BmToll9可能参与了LPS的识别。因此我们推测:家蚕的TOLL途径存在着一个旁路分支,LPS能够不依赖于细胞介素Sp?etzle,直接与BmMLs结合后被BmToll9识别,从而启动TOLL信号途径诱导抗菌肽的表达和细胞自噬。本项目拟通过LPS诱导家蚕后细胞自噬的检测、BmMLs和BmToll9对LPS的结合试验及BmToll9的RNAi等方法,研究BmMLs和BmToll9在LPS诱导家蚕免疫反应通路中的作用,为阐明鳞翅目昆虫先天免疫信号通路提供科学依据。
英文摘要
昆虫对病原物的防御方式为先天免疫(innate immune),果蝇(Drosophila)中,PGRP-SA/SD识别Lys-PGN后活化Späetzle,进而与Toll受体结合,启动Toll信号途径。脊椎动物也通过TLR(Toll-like receptor)识别病原物,但其可以直接识别不同的PAMPs。研究表明脂多糖(LPS)通过TLR4引起哺乳动物强烈的免疫反应和自噬,我们在家蚕(Bombyx mori)的研究中发现LPS能引起家蚕抗菌肽的表达,预示着家蚕中有受体可以识别LPS并诱发先天免疫,为了研究鳞翅目昆虫经LPS诱导后其先天免疫情况,及跨膜受体Toll在进化上的功能,我们以家蚕为模式生物,进行了以下内容的研究:(1)通过抑菌实验检测LPS引发活体家蚕的免疫反应的情况。(2)原核表达家蚕ML蛋白BmEsr16、BmML-1,Elisa检测其是否能和LPS体外结合。(3)克隆BmToll9至PIEX-4-GFP载体,转染家蚕细胞,研究BmToll9是否对LPS有响应。(4)构建基因表达谱数据库,筛查响应LPS诱导的下游免疫相关基因。.本研究获得了以下结果:.1. LPS等诱导家蚕6-18h后,提取家蚕血淋巴,检测其抑菌活性,结果显示LPS可以诱导家蚕抗菌肽的表达。.2.以哺乳动物中响应LPS的蛋白质为模板,对家蚕基因组数据库进行BLAST搜索,寻找到了三条ML蛋白质序列及BmToll9,结构域的分析,发现BmToll9与TLR4在结构及进化上是最接近的。.3. RT-PCR获得BmEsr16、BmML-1基因,克隆表达获得纯化的BmEsr16和BmML-1重组蛋白,Elisa检测发现BmEsr16和LPS可在体外直接结合。.4. 克隆BmToll9基因至PIEX-4-GFP载体上,转化家蚕Bm12细胞,共聚焦显微镜观察到BmToll9基因成功表达并跨膜。用LPS诱导转染成功的细胞,qRT-PCR发现抗菌肽Moricin、Attacin1基因的转录表达活性上调,但是cecropinB6基因的转录活性没有显著变化,推测这两类抗菌肽可能通过不同的免疫途经进行调控。.5. 为了进一步筛查寻找可能的通路基因,我们构建了差异基因表达谱数据库,通过生物信息学分析找到了大量响应LPS的免疫相关因子,为进一步筛查LPS诱导的昆虫免疫反应做数据储备。
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
Toll-Spätzle信号通路在家蚕变态期中肠组织重建中的作用及分子调控机制
  • 批准号:
    32270515
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    54万元
  • 批准年份:
    2022
  • 负责人:
    杨婉莹
  • 依托单位:
蛋白质乙酰化修饰在温度诱导家蚕滞育发生中的作用
  • 批准号:
    --
  • 项目类别:
    省市级项目
  • 资助金额:
    10.0万元
  • 批准年份:
    2021
  • 负责人:
    杨婉莹
  • 依托单位:
BmToll9与病原PAMPs直接识别功能及其在家蚕先天免疫中的作用
  • 批准号:
    31970462
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    58.0万元
  • 批准年份:
    2019
  • 负责人:
    杨婉莹
  • 依托单位:
国内基金
海外基金