皮层蛋白羧基端功能的酪氨酸磷酸化调节机制及其在肿瘤细胞运动中的作用研究

皮层蛋白增强肌动蛋白聚合，对细胞运动和肿瘤转移发挥促进作用。皮层蛋白羧基端SH3结构域功能受到酪氨酸磷酸化的调节，然而确切的机制及其在细胞运动中的作用还不清楚。本项目拟构建基于皮层蛋白SH3功能的蛋白传感器并导入细胞，检测皮层蛋白磷酸化前后荧光共振能量转移变化，分析磷酸化对皮层蛋白构象的影响，并设计皮层蛋白突变体，解析皮层蛋白构象改变必需的氨基酸序列。采用pull-down分析检测磷酸化对皮层蛋白和已知SH3结合蛋白相互作用的影响；采用双向电泳，观察与磷酸化和未磷酸化皮层蛋白结合的肿瘤蛋白谱的差异，通过质谱分析鉴定差异条带，以期发现新的结合蛋白。最后分析磷酸化调节的皮层蛋白与SH3结合蛋白相互作用与肿瘤细胞迁移、内吞、侵袭伪足形成及转移能力的关系。通过本研究将明确皮层蛋白受酪氨酸磷酸化调节的确切机制，有助于从分子水平认识肿瘤细胞的运动特性和侵袭转移的内在机制。