基于上皮间质转化（EMT）的藤黄酸抗肿瘤侵袭转移作用机制研究

在项目研究过程中，我们建立了合理的肿瘤侵袭转移动物模型，如乳腺癌细胞MDA-MB-231的原位接种肺转移模型和A549肺癌细胞尾静脉注射肺转移模型等模拟癌症转移过程，评价藤黄酸的体内抗肿瘤转移作用。体外评价了藤黄酸对高转移肿瘤细胞B16F10和A375在粘附、迁移、侵袭及细胞外基质水解的影响，建立转化生长因子TGF-β1刺激肿瘤细胞发生上皮间质转化(EMT)模型，利用免疫荧光，免疫印迹以及实时定量PCR实验方法研究藤黄酸对 EMT 关键表型分子(E-cadherin、N-cadherin、vimentin和MMPs等)的调节作用，从而确定藤黄酸通过抑制转录因子TWIST1蛋白水平在转录水平上调控EMT过程。前期研究结果表明藤黄酸可能作用于多条信号转导通路从而抑制肿瘤细胞侵袭转移，如 Integrin-Src-FAK、Ras-Raf-MAPK、PI3K-AKT及NF-κB通路等。由此我们利用蛋白免疫印迹实验检测相关通路的蛋白激酶的磷酸化水平，寻找出NF-κB通路是藤黄酸抑制肿瘤细胞EMT的关键信号通路，并且分别加入了NF-κB通路激活剂和其他通路的特异性抑制剂以确定NF-κB通路的重要性。藤黄酸阻断EMT过程是通过抑制IKK，IκB的磷酸化，从而抑制转录因子NF-κB p65入核与EMT相关转录因子TWIST1的启动子结合。根据藤黄酸对EMT的关键信号通路的相关基因及蛋白的调控，采用基因转染，小干扰RNA等方法找寻其可能的靶点，研究发现藤黄酸的直接配体转铁蛋白受体在藤黄酸抑制EMT过程中并未发挥关键调控作用。本研究阐明藤黄酸在抗肿瘤侵袭转移中抑制EMT的作用机制，为藤黄酸的应用提供新的理论依据，并且为基于 EMT 的新型抗肿瘤侵袭和转移药物研发提供了参考。