人精子泛素化的蛋白质组研究及功能意义

已知形态正常与异常的人精子都会泛素化。申请人推测两类精子泛素化的蛋白成分或修饰位点不同，形态正常精子的泛素化与受精有关。为此，本课题以无吸烟史且已生育的30～40岁男性捐精者为对象，按WHO标准以不连续Percoll梯度密度离心法分离精子，检测其活力、形态和功能以确定活力精子组和无活力精子对照组。荧光探针标记精子及其线粒体的活力后，免疫荧光染色分析精子的泛素化与其表达UCHL-1/3和蛋白酶体的细胞定位、表达水平和细胞数量等关系，以及与精子活力、形态和线粒体功能的相关性；同时，应用体外精卵融合实验，分别添加泛素、UCHL-1/3、蛋白酶体的特异性抗体或抑制剂，检测卵母细胞受精率和精子线粒体功能的变化。最后，质谱法鉴定比较经泛素结合蛋白纯化和蛋白凝胶电泳分离的精子泛素化蛋白的成分及泛素修饰位点的异同。从而深入探讨人精子泛素化的分子机制及功能，为不孕不育症诊断治疗及优生优育，提供新的干预手段。