中国汉族人家族性局灶节段肾小球硬化症致病基因定位及功能研究

我们通过对一个大型汉族人FSGS（合并IgAN）家系进行全基因组连锁分析，通过全基因组SNP芯片（AFFy10K）扫描所得到的数据进行连锁分析，将该家系的致病基因定位在14号染色体（14q32），进一步通过单倍型分析、外显子测序和Sanger测序的方法，我们将致病遗传变异锁定在7.4cM的区域，单倍型分析及深度测序发现，其中位于INF2的p.S85W为致病突变，此外我们在另一个家系中还发现另一个INF2突变，p.S128_Q129insVRQLS。通过筛查发现INF2在汉族人FSGS家系中的突变率为2.9%。为进一步研究INF2及相应突变的致病机制，我们构建体外人足细胞培养模型，激光共聚焦方法观察转染正常对照组，以及转染质粒组，各组足细胞INF2蛋白在细胞内的定位情况，观察各组细胞细胞骨架蛋白F-actin表达情况。通过Westernblot方法检测正常对照组、野生型组和突变组足细胞INF2蛋白水平的变化，以及检测各组细胞转录因子血清反应因子（SRF）及磷酸化SRF（p-SRF）表达水平的差异。我们发现S85W基因突变影响INF2在细胞中的定位，影响肾小球足细胞F-actin的正常结构，引起细胞骨架的破坏而达到损伤作用，S85W基因突变下调INF2蛋白的表达，可能与改变其空间构象有关。为进一步在汉族人中定位FSGS新的致病基因，我们已完成对4个FSGS家系的全基因组外显子测序工作，成功发现FSGS新的致病基因X，该基因已在其他的FSGS家系中得到验证，在筛查的40个家系中，5个家系找到该基因突变，突变率高达12.5％。保守性分析显示突变位于不同物种的保守区域，提示该改变可能引起功能学改变。目前正在散发病人中进行验证，并着手功能学研究。本研究首次发现INF2突变可导致汉族人成人迟发型FSGS，发现2个新的突变，其中S85W基因突变影响INF2在细胞中的定位，影响肾小球足细胞F-actin的正常结构，下调INF2蛋白的表达，可能是其导致FSGS发生的原因。此外我们定位一个新的基因可导致汉族人FSGS，该基因突变率在家族性FSGS中达到12.5%，目前正对其致病机制进行进一步研究。