对双氧水敏感的酵母mutator菌株的构建及其在体内定向进化中的应用

在蛋白质定向进化的研究中,对目的基因引入随机突变的策略通常分为体内（in vivo）和体外(in vitro)两种。现在体内定向进化常用的菌株是大肠杆菌XL1-Red mutator菌株,但是这一菌株存在以下缺点:一是突变率不可控；二是在mutator菌株处理完后要立刻提取质粒,防止再次发生突变，然后转入正常宿主中筛选；三是因大肠杆菌是原核表达系,有些真核生物蛋白的应用受到了限制.根据目前mutator strain的限制，本研究将利用酵母构建一新的真核mutator菌株。利用敲除酵母的氧化损伤修复有关的三个基因sod1、cat1和srx1，构建了三株条件缺失的酵母mutator菌系。它将具有以下的特点：真核系统；突变率可控；无需改变宿主可直接筛选。课题将利用这一系统进行纤维素酶和淀粉酶的定向进化的研究。该系统的构建，将为蛋白质定向进化和代谢工程的研究提供一有利的工具。