ErbB-3结合蛋白Ebp1在肝细胞肝癌中上调表达的生物学意义研究

Ebpl是新发现的ErbB-3胞内结合蛋白，是增殖相关的PA2G4家族中的一员，可抑制多种肿瘤细胞的增殖和诱导细胞分化，但肝癌中的作用尚未见报道。本课题（1）利用cDNA 基因芯片技术筛选肝癌组织中差异表达基因，结果发现 Ebp1是肝癌中过高表达的基因之一，利用Northern bloting技术进一步鉴定了Ebp1 基因mRNA在肝癌组织和不同肝癌细胞系中高表达，且均显示1.7Kb和2.2Kb两个条带，表明Ebp1基因表达与肝癌发生发展有关。（2）利用免疫组织化学方法观察肝癌组织芯片中ErbB2、ErbB和Ebp1蛋白的表达，并分析Ebp1与肝癌临床病理参数之间的关系，证实了Ebp1与ErbB3蛋白的表达具有正相关，并Ebp1蛋白阳性表达与HCC 患者HbsAg感染有关，但是与患者年龄、性别、肿瘤大小及分化程度等临床病理因素无关。（3）构建了真核表达载体pEGFPC1-Ebp1，并通过脂质体转染法构建了稳定表达Ebp1蛋白的HepG2细胞和NIH3T3细胞。MTT法、克隆集落形成实验、细胞周期和凋亡检测等实验表明，Ebp1高表达促进肝癌细胞生长和增殖。（4）成功构建了Ebp1长片段p48，并激光共聚焦扫描显微镜观察Ebp1 p48编码蛋白表达，结果HepG2细胞和NIH 3T3细胞浆内可见大量GFP融合Ebp1蛋白的表达，而Ebp1短片段p42基因克隆未能成功。（5）ErbB3配体HRG促进稳定转染Ebp1 p48的HepG2细胞增殖和迁移，并磷酸化Akt的表达增多，表明ErbB3-Ebp1 p48长片段可能是新的肝癌侵袭转移相关信号通路，并且可能通过Akt信号通路。本研究证实了Ebp1是一种新的肝癌相关候选基因，并初步探讨了Ebp1 长片段p48在肝癌细胞生长增殖的影响，为进一步深入研究ErbB3-Ebp1通路在肝癌中的作用研究奠定了基础。