本研究分离纯化及体外表达了沙雷氏菌FS14分泌的SP蛋白，证实该蛋白是一种具有独特热稳定性的，具有蛋白酶和DNA酶活性的双功能酶。本研究还解析了直接从培养液上清中纯化的SP蛋白的晶体结构，确认其为蛋白酶，且回收的晶体蛋白的确具有DNA酶活性。为了能够确认该蛋白的双功能特性，我们分别对该蛋白的编码基因和沙雷氏菌的核酸酶的编码基因nucA进行了缺失突变，并获得了它们的突变株。对突变体的研究结果显示，FS14的确能分泌胞外耐热DNA酶，但可能不止一个；我们纯化了SP 蛋白基因突变株中具有DNA酶活性的蛋白，发现其也同时均有蛋白酶和DNA酶活性；其质谱分析结果并结合我们与其他实验室合作测定的FS14菌株的基因组序列，确认FS14中还有三个与该SP蛋白有较高同源性的蛋白，我们分别将它们命名为SPA、SPB和SPC；对FS14中SP家族的这三个蛋白进行了体外重组表达和活性测定的结果也显示，它们均为双功能酶。此外，我们构建了30几个SP蛋白突变体蛋白，对它们的DNA酶活性位点进行了研究，结果显示，蛋白酶活性位点与DNA酶活性位点无关。为了最终能证明FS14菌株胞外的耐高温DNA酶活性的确来自于SP蛋白家族，以及确定DNA酶的活性位点，我们必须要将该菌所具有的共四个SP蛋白完全敲除。但是由于FS14具有多重耐药性，其它同属菌的遗传操作体系在该菌中不能够应用，因此为了构建该四重突变株，我们从头构建了用于突变的载体，并应用该载体进行了体内突变的研究。目前，我们已获得SP蛋白和SPB基因的双基因缺失突变株，正在构建三基因缺失突变株和四个基因全部缺失的突变株。四个SP蛋白酶基因全部缺失的突变株的获得，将为证明本项目所提出的观点提供最充分的实验材料和证据，并能为进一步确定DNA酶的活性位点打下坚实的基础。此外，由于我们发现SP蛋白与灵菌红素的合成有关，因此我们克隆了灵菌红素合成相关酶类的基因，还解析了PigE催化结构域的的结构，灵菌红素和SP蛋白的相关性研究正在进行中。