黄瓜韧皮部筛管中的动蛋白的鉴定与功能研究

提取黄瓜韧皮部液蛋白，通过微管共沉淀实验，结合LC-MS/MS鉴定了黄瓜韧皮部液中的三个马达蛋白——Kinesin蛋白。表达分析结果显示，该蛋白在所有组织中都有表达，但是在果实中优势表达，并且随果实发育表达量特异上调。暗示黄瓜可以通过韧皮部Kinesin的运输，整体的系统调控果实的发育。进一步研究了Kinesin在果实发育中的表达模式，与不同果实大小的黄瓜果实生长参数的相关性证明Kinesin参与了黄瓜果实早期发育过程中细胞快速分裂和细胞膨大过程。克隆了Kinesin基因，体外验证了这三个Kinesin蛋白的微管结合活性和ATPase活性，证明三个Kinesin是有功能的蛋白。通过制备抗体，结合原生质体瞬时表达，western-blot以及免疫荧光标记实验，证明了CsKinesin1参与了黄瓜果实早期细胞的快速膨大，CsKinesin2参与了黄瓜果实叶绿体的分裂，CsKinesin3参与了黄瓜果实快速分裂末期成膜体的建成。研究证明了微管马达蛋白在黄瓜果实发育中的重要作用。