α1,2岩藻糖基转移酶基因突变致H血型抗原减弱机制的研究

项目拟研究申请者先前发现的α1,2岩藻糖基转移酶FUT1基因突变点对H血型抗原表达的影响，通过分析基因突变后FUT1的转录能力、表达产物（酶）量及其活性，阐明突变导致H血型抗原表达量减少的机制，将为揭示血型抗原的生成过程提供重要依据。项目利用先天性突变样本构建FUT1基因35C>T、293C>T、547 AG del、658C>T、682A>G突变的FUT1 cDNA表达质粒，将突变体质粒转染COS-7细胞进行表达分析，通过荧光定量PCR、流式细胞术等技术，获取突变点对FUT1基因转录过程的影响，分析转录的活性变化；通过系列筛选构建稳定表达株，获取并纯化突变体表达的蛋白，分析表达蛋白的氨基酸组成和长度以及蛋白的生物学活性（酶的活性），检测重组α1,2岩藻糖基转移酶与底物的催化活性，模拟分析突变后所形成蛋白结构和酶结合域的改变，阐明突变点引起FUT1功能缺陷导致H血型抗原减弱的分子机制。