Ndfip1蛋白抑制神经细胞凋亡的分子机制研究

本课题采用人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞、人中枢神经元前体细胞NT2构建Ndfip1可控表达体系，获得Ndfip1内源性表达、过表达、显性负表达及抑制表达四种不同细胞模型。通过去除生长因子等方法诱导上述细胞株发生细胞凋亡，再通过开启或关闭Ndfip1的表达研究Ndfip1在抑制神经细胞凋亡过程中与Hect家族蛋白的相互作用，检测Ndfip1抑制神经细胞凋亡过程中各种Caspase的活性变化、细胞内氧化还原状态变化、线粒体膜电位变化、细胞色素c的定位、Apaf-1蛋白、Bcl-2家族成员的表达变化及泛素化水平，并研究Ndfip1与ERK1/2以及IAP、XIAP等抑制凋亡蛋白间的关系；接着通过Ndfip1基因敲除(knock out)小鼠的胚胎神经细胞验证Ndfip1在离体情况下对神经细胞的作用，从而揭示Ndfip1抑制神经细胞凋亡的分子机制，阐述Ndfip1对神经细胞作用的生物学意义。