基于耐高温mutS蛋白、pfu DNA聚合酶、dU修饰寡核苷酸探针的SNP检测技术

与含dU碱基双链DNA结合，pfu DNA聚合酶不能催化DNA延伸反应。如果dU处于错配碱基附近，MutS蛋白与DNA中错配碱基的结合将阻止pfu DNA聚合酶与含dU的DNA结合，使pfu DNA聚合酶能够催化DNA延伸反应。利用这一特征，建立独特的SNP检测技术。进行PCR循环的SNP检测反应溶液含有dU修饰的寡核苷酸探针，单链DNA检测目标，报告DNA模板及其上下游引物，MutS蛋白和pfu DNA聚合酶。若寡核苷酸探针与检测目标完全配对，MutS不能与杂合分子结合，含dU碱基的DNA将与pfu DNA聚合酶结合，阻止报告DNA模板的PCR扩增反应；反之，含有错配碱基的杂合分子能够与MutS结合，不能与dU双链DNA结合的pfu DNA聚合酶可以催化报告基因PCR扩增。利用这种技术进行HLA分型，证实本法检测结果准确、操作简便、灵敏度高、与现有实验室方法和设备兼容，具有广阔应用前景。