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Bti毒性蛋白基因重组入球形芽孢杆菌BS-10染色体及其表达和改良菌株活性的研究

批准号:
30901246
项目类别:
青年科学基金项目
资助金额:
20.0 万元
负责人:
赵松
学科分类:
传染病媒介生物
结题年份:
2012
批准年份:
2009
项目状态:
已结题
项目参与者:
徐健、戴洋、张纯、唐建霞、刘琴、朱荫昌

项目摘要

结项摘要

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中文摘要
控制蚊虫是防治疟疾、乙型脑炎等多种人类传染疾病的重要措施。由于长期大量使用化学农药灭蚊可能带来农药残留等环境问题和耐药性的产生,蚊虫的生物防治具有独特优势。球形芽胞杆菌(Bs)和苏云金芽胞杆菌以色列亚种(Bti)这两种重要的生物灭蚊蚴剂在活性蛋白,作用机制,杀蚊谱等方面有所不同。本课题组前期工作已克隆到Bti的毒性蛋白基因cry4Ba、cryllAa和cyt1A,并在大肠杆菌中进行了表达。为应用Bti的毒性基因来改良球形芽孢杆菌Bs-10菌株这一我国重要的杀蚊菌资源,本项目拟采用转座子介导的基因重组方法将Bti毒性基因重组入Bs的染色体,对Bti毒性基因的表达及活性进行检测,定位其在Bs染色体上的整合位点,以期重组菌株能表达Bti的毒性蛋白并稳定遗传,提高Bs灭蚊蚴效能,拓宽杀蚊谱。本项目探索用基因工程手段改良Bs-10菌株的新方法,为建立广谱,高效生物灭蚊蚴剂打下理论和技术基础。
英文摘要
本研究采用转座子介导的基因重组方法,对建立具有广谱高效杀蚊效应的Bs-10株球形芽孢杆菌改良工程菌进行了探索。在当前生态文明建设的要求下,蚊虫的生物防治对于补充和替代化学农药灭蚊,控制疟疾、乙型脑炎等多种蚊媒疾病具有重要意义。本研究克隆了Bti毒性蛋白基因cry4Ba、cryllAa和cyt1A,并在大肠杆菌中进行了原核表达;建立了将转座子衍生载体重组质粒转化到球形芽孢杆菌Bs-10菌株中的方法,通过对感受态的培养,制备,转化缓冲液的选择,转化后复苏等实验参数的试验,发现Bs-10菌株在营养缺乏条件下培养制备感受态,电击转化效率能得到明显提高;检测了Bti毒性基因在Bs-10转化菌株中的表达,并筛选和优化了重组质粒中目的基因上游的启动子序列,为外源基因在野生型球形芽孢杆菌中的成功表达进行了探索并积累经验。
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