CD40和骨桥蛋白特异性siRNA对MRL-Lpr狼疮小鼠治疗作用的实验研究

批准号:
30960354
项目类别:
地区科学基金项目
资助金额:
21.0 万元
负责人:
庞春艳
依托单位:
学科分类:
H1107.自身免疫性疾病
结题年份:
2013
批准年份:
2009
项目状态:
已结题
项目参与者:
王永福、郭春林、耿丽霞、刘媛、常志芳、冯秀媛、任艳玲、安燕、张文兰
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中文摘要
系统性红斑狼疮( SLE)是一种多系统受累的自身免疫性疾病。骨桥蛋白能诱导B细胞多克隆化,使之产生过量免疫球蛋白,膜蛋白CD40在活动期SLE患者B淋巴细胞的表达增加,其水平与疾病活动度有关。.本课题针对CD40和OPN各设计一段siRNA,构建真核表达载体。将构建成功的重组体采用脂质体转染小鼠J774.1细胞株,RT-PCR检测CD40和OPN mRNA表达水平的变化;检测上清中细胞因子IL-1等;TUNEL检测J774.1细胞凋亡情况。同时将重组体注射MRL-Lpr狼疮鼠,ELISA检测细胞因子TNF-α等细胞因子;RT-PCR检测脾脏CD40 mRNA及肾脏OPN mRNA表达的变化水平;免疫单扩法检测IgS、C3、C4及CRP的变化;间接免疫荧光检测dsDNA。从而进一步观察两段siRNA对SLE的潜在治疗作用,为SLE的基因治疗提供试验依据。.本实验具有广阔的临床应用价值。
英文摘要
慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。pLL3.7载体是常用的慢病毒RNAi载体,因带有EGFP,发出绿色荧光,可以用作筛选标记。前期的研究结果显示:CD40和OPN的siRNA质粒载体采用脂质体转染小鼠巨噬细胞J774.1的效率很低,没法进行后续实验,因此,本研究该为构建CD40和OPN的siRNA慢病毒载体,以CD40其中一段siRNA(命名为pLL3.7-CD40-siRNA)做预实验,制备病毒并感染小鼠巨噬细胞J774.1,从而大大提高了J774.1细胞的感染效率,约为58.6%,实时荧光定量RT-PCR检测CD40的基因沉默效果,结果显示:pLL3.7-CD40-siRNA组CD40 mRNA的表达明显低于对照组和pLL3.7空载体组,差异有统计学意义(P<0. 05)。有研究发现CD40/ CD40L信号途径在系统性红斑狼疮(SLE)的发病中起关键作用,Carreño等也研究发现SLE患者较健康对照者高表达共刺激分子CD40。所以,采用siRNA技术降低CD40 mRNA的表达,减弱B细胞的免疫反应,从而可降低CD40/ CD40L信号途径在SLE中的作用。
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
基因沉默肽基精氨酸脱亚氨酶4的表达对CIA小鼠治疗作用的实验研究
- 批准号:81560270
- 项目类别:地区科学基金项目
- 资助金额:39.0万元
- 批准年份:2015
- 负责人:庞春艳
- 依托单位:
国内基金
海外基金
