乳酸乳球菌递呈的嗜肺军团菌新型FlaA/MompS疫苗的构建和免疫效应研究

课题组对嗜肺军团菌鞭毛蛋白进行优化得到三个蛋白，分别是鞭毛蛋白N端（命名为FlaA N），鞭毛蛋白C端（命名为FlaA C），鞭毛蛋白N端和C端连接重组蛋白（命名为FlaA N/C）。将三个蛋白皮下注射后，在0h、2h、4h、8h、12h、24h进行眼眶取血，ELISA进行IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-检测，结果表明，仅IL-6水平在2-4小时出现显著升高，其中，FlaA N/C蛋白刺激的IL-6水平最高。FlaAN/C蛋白皮下注射小鼠后2-4小时，小鼠肺组织IHC和Western-blot结果均显示SOD2、COX2、NF-κB-p65升高显著。A/J小鼠感染保护实验表明，在嗜肺军团菌108数量级感染前2h皮下注射FlaA N/C蛋白能够保证感染小鼠100%存活，4 h皮下注射FlaA N/C蛋白能够保证感染小鼠80%存活，在嗜肺军团菌109数量级感染前4h皮下注射FlaA N/C蛋白能够保证感染小鼠100%存活。HE染色结果表明，108数量级感染前2小时和4小时皮下注射FlaA N/C肺组织病理变化在1、3、7天分别为轻、重、轻，而在感染前8小时注射所有实验小鼠在5天后均死亡。MompS蛋白预测的三个B细胞表位中，以GP-15的抗体滴度最高。构建FlaA N/C-GP-15载体转化乳酸乳球菌后，经口服方式免疫A/J小鼠，5.17×108CFU嗜肺军团菌感染后小鼠存活率能够达到40%。课题研究表明，FlaA N/C感染前2-4小时皮下注射后能够有效激活小鼠保护性细胞因子分泌，保护机体抗致死剂量嗜肺军团菌感染，具有良好的临床应用前景，转化FlaA N/C-MompS的乳酸乳球菌具有一定的抗嗜肺军团菌效力，后续还应继续优化增强抗感染效力。课题组发表SCI论著2篇，中文论著3篇，投稿SCI论著2篇，申请发明专利2项，申请获批省科技厅应用基础研究项目1项，申请国家自然科学基金面上项目1项。课题内容外研究成果：1. FlaA N/C蛋白具有辐射防护能力；2.FlaA N/C蛋白miRNA芯片结果表明，其抗凋亡调控通路可能在辐射防护抗性机制中具有重要作用；3. 围绕辐射防护抗性申请发明专利1项，撰写外文论著1篇投稿SCI杂志。