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HER2-CpG-ODN联合Rg1诱导特异性CTL细胞抗卵巢癌作用的实验研究
结题报告
批准号:
81302242
项目类别:
青年科学基金项目
资助金额:
23.0 万元
负责人:
许天敏
依托单位:
学科分类:
H1818.肿瘤免疫治疗
结题年份:
2016
批准年份:
2013
项目状态:
已结题
项目参与者:
崔满华、常伟勤、苏曼曼、辛颖、司丽慧、王玲、赵丽苹、吴书莹、苏平
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中文摘要
卵巢癌是妇科恶性肿瘤中死亡率最高的疾病,寻找有效的治疗方法来提高其生存率及生活质量是目前急需解决的问题。细胞毒性T淋巴细胞(CTL)具有细胞毒活性高、抗肿瘤谱广的特点,有望成为针对卵巢癌患者进行个体化治疗的新方法。但是目前研究中的CTL细胞存在的抗原特异性差,缺乏有效的抗原递呈作用,细胞数量少等问题。项目组利用已经成熟掌握的蛋白大规模发酵技术、制备HER2特异性CTL细胞的培养技术、细胞质量评估技术以及鉴定技术,将卵巢癌组织中高表达的人源HER2抗原胞外区(ECD)蛋白在80L发酵罐中进行发酵与纯化,提高产量、降低成本。将足量的HER2抗原与免疫佐剂CPG-ODN结合,同时联合人参皂甙Rg1诱导建立从20ml血液中就获得1×1010高活性的、单一克隆的HER2-CTL培养体系,在此基础之上研究其抗卵巢癌作用。弥补了目前相关研究中存在的不足,为卵巢癌患者进行个体化的细胞免疫治疗提供实验基础。
英文摘要
Ovarian cancer is the highest mortality gynecological malignancies, looking for more effective treatment methods to improve the survival rate and quality of life of patients with ovarian cancer is urgently needed to resolve the problem. Cytotoxic T lymphocytes (CTL) having a high cytotoxic activity, the characteristics of the broad spectrum of anti-tumor, and is expected to become a new method of individualized immunotherapy for patients with ovarian cancer. But now the presence of antigen-specific CTL cell research and use, lack of effective antigen presentation, a small number of cells and other issues. Project team used genetic engineering techniques, large-scale fermentation technology, purification techniques, source HER2 antigen highly expressed in ovarian cancer tissue outer region of the cell (ECD) gene was amplified expression, while further fermentation in 80L fermenter purification, increase productivity, and reduce costs. And sufficient quantities of the HER2 antigen and immune adjuvant CPG-ODN combined, at the same time joint the ginsenosides Rg1 induced by high activity and stability of HER2-CTL culture system built from 20ml blood. The project team has been mastered preparation HER2-specific CTL cell culture techniques, cell quality assessment technology, and identification techniques to study the growth inhibition of ovarian cancer on this basis, the role of anti-adhesion, invasion, to make up for the current research the field in the presence of insufficient specificity HER2-CTL individualized immunotherapy for patients with ovarian cancer to provide experimental basis.
卵巢癌是妇科恶性肿瘤中死亡率最高的疾病,寻找有效的治疗方法来提高其生存率及生活质量是目前急需解决的问题。细胞毒性T淋巴细胞(CTL)具有细胞毒活性高、抗肿瘤谱广的特点,有望成为针对卵巢癌患者进行个体化治疗的新方法。通过本项目研究,项目组成熟掌握制备HER2特异性CTL细胞的培养技术、细胞质量评估技术以及鉴定技术,将卵巢癌组织中高表达的人源HER2抗原胞外区(ECD)蛋白进行发酵与纯化。将HER2与免疫佐剂CPG-ODN结合,同时联合人参皂甙Rg1诱导建立高活性的、单一克隆的HER2-CTL培养体系。通过MTT法检测HER2-CTL对人卵巢癌细胞株SKOV-3的杀伤作用;生长曲线法观察HER2-CTL对人卵巢癌细胞SKOV-3的生长抑制作用;流式细胞仪检测HER2-CTL处理前后人卵巢癌细胞株SKOV-3的细胞周期及凋亡率;用实时定量PCR、Western blot的方法检测HER2-CTL处理前后人卵巢癌细胞株SKOV-3中相关凋亡蛋白的表达变化;划痕实验检测HER2-CTL对SKOV-3细胞迁移能力的影响;Transwell小室实验检测HER2-CTL对SKOV-3细胞侵袭能力的影响;建立裸鼠皮下卵巢癌模型,检测HER2-CTL对裸鼠体内卵巢癌的生长抑制作用。实验证实HER2-CTL具有高度抗原特异性,在体外对卵巢癌细胞SKOV-3 有显著的杀伤、抑制作用,能够破坏卵巢癌细胞SKOV-3正常的细胞周期,使之停滞在S期,同时亦可以调节多种凋亡基因,诱导卵巢癌细胞SKOV-3凋亡,并抑制体外卵巢癌细胞的迁移和侵袭。在相关机制方面的研究表明,HER2-CTL可以通过影响卵巢癌细胞SKOV-3 PI3K/Akt通路相关蛋白的表达及Caspase-3蛋白的相关作用,发挥抗卵巢癌、逆转化疗耐药的作用,但其具体机制仍需进一步深入探讨。本项目的研究成果弥补了相关研究中存在的不足,为卵巢癌患者进行个体化的细胞免疫治疗提供实验基础。
期刊论文列表
专著列表
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会议论文列表
专利列表
DOI:--
发表时间:2014
期刊:European Journal of Gynaecological Oncology
影响因子:0.4
作者:Weiqin C;Shuying W;Yang L;Manhua C
通讯作者:Manhua C
A novel uPAg-KPI fusion protein inhibits the growth and invasion of human ovarian cancer cells in vitro.
新型uPAg-KPI融合蛋白体外抑制人卵巢癌细胞的生长和侵袭
DOI:10.3892/ijmm.2016.2540
发表时间:2016-05
期刊:International journal of molecular medicine
影响因子:5.4
作者:Zhao LP;Xu TM;Kan MJ;Xiao YC;Cui MH
通讯作者:Cui MH
DOI:--
发表时间:--
期刊:现代肿瘤医学
影响因子:--
作者:程琳;许天敏
通讯作者:许天敏
DOI:10.3892/ijo.2014.2750
发表时间:2015-02
期刊:International journal of oncology
影响因子:5.2
作者:Man-man Su;Weiqin Chang;M. Cui;Yang Lin;Shuying Wu;Tianmin Xu
通讯作者:Man-man Su;Weiqin Chang;M. Cui;Yang Lin;Shuying Wu;Tianmin Xu
DOI:--
发表时间:2015
期刊:国际妇产科学杂志
影响因子:--
作者:赵丽苹;许天敏;杨如琳;崔满华
通讯作者:崔满华
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