人血IL-18作为新分子标志物预测诊断深静脉血栓的机制研究

深静脉血栓 ( Deep Venous Thrombosis ，DVT)是一种血液在深静脉内异常地凝结导致的静脉回流障碍性疾病，由于目前诊断技术所限，即使进行积极治疗仍有较高死亡率，且近几年世界范围内DVT发病率有上升的趋势。现阶段深静脉血栓的诊断主要依赖于影像学和实验室检查, 在血栓形成之后才能明确诊断，无法对其针对性的预防和治疗。如能预测诊断DVT，可实现更有针对性的预防、更早有效的治疗，减少DVT的危害。前期研究中我们发现白介素18（IL-18）和DVT的发生密切相关，有可能作为DVT预测诊断的分子标志物。本项目对IL-18作为DVT预测诊断分子标记物的可能性在分子、细胞水平及动物模型上进行了以下探索：1.制定了临床深静脉病人、对照组病人组、正常组的纳入标准和收集方法，收集120例DVT病人、实验组（创伤组）、对照组血液样本，Real-time PCR和ELISA检测发现在创伤组和DVT组中IL-18的表达比正常组上调，创伤组与DVT组之间IL-18的表达无变化，由此我们认为在我们收集的病例样本中，IL-18与DVT相关。2.构建IL-18过表达/干扰载体人IL-18-PCDH-GFP/人IL-18-LMP shRNAmir1转染人静脉内皮细胞进行基因芯片及蛋白质双向电泳(2-DE)及二级质谱（MS/MS）分析，发现与正常细胞相比过表达载体IL-18 -PCDH-GFP转染细胞有17条信号通路下调，16条信号通路上调。与正常细胞相比干扰载体IL-18-LMP shRNAmir1转染细胞有23条信号通路下调，9条信号通路上调。以上数据可指导今后IL-18在DVT形成中调控作用的研究。3.构建大鼠的过表达/干扰载体Rat IL-18-pCDH-GFP/ IL-18-LMP shRNAmir1转染细胞收获毒液分别注射大鼠尾静脉，狭窄法造深静脉血栓（DVT）模型，观察血栓形成情况发现IL-18过表达组的平均血栓长度、平均血栓重量均较IL-18抑制组高，两组差异具统计学意义，过表达IL-18可促进大鼠血栓的形成，抑制IL-18可减少大鼠血栓的形成。IL-18对大鼠DVT的形成起调控作用。本项目针对IL-18进行的研究数据说明IL-18在DVT形成中起重要作用，有可能作为DVT预测诊断的候选分子标记物。