利用异种GVHR裸鼠模型探讨重组HLA-G二聚体诱导免疫耐受

本课题首先通过对几种培养基的HLA-G二聚体表达量的比较，选择确定了无血清培养基作为稳定表达HLA-G二聚体的细胞株表达培养基。并采用了PEG浓缩法、离子交换层析法、超滤、蛋白A柱等四种浓缩与纯化方法，对HLA-G二聚体进行了的浓缩与纯化，通过PAGE、ELISA、微珠流式构象检测以及同种T细胞增殖反应模型等方法鉴定，确定了PEG浓缩方法可获得较高纯度、较高含量的HLA-G二聚体并保持其抑制效应。.本课题利用同种T细胞反应模型，在体外研究HLA-G二聚体对T细胞耐受的影响，研究结果表明，HLA-G二聚体可抑制同种CD8+T细胞活化，诱导同种反应体系中CD4+的Treg的增加；抑制同种CD8+细胞分泌IFN-γ，促进同种CD8+细胞分泌IL-4，但对同种CD8+细胞分泌TGF-beta 无影响。本课题还体外研究了HLA-G二聚体对DC细胞的成熟与巨噬细胞极化的影响，研究结果表明HLA-G二聚体可抑制DC细胞的成熟，抑制M1的极化，而对M2极化则无影响。.本课题根据模型鼠的生存期、人CD3+细胞在尾静脉血、组织、器官中的浸润情况等指标研究，确定并以NOD-SCID小鼠为模型鼠，建立稳定可靠的X-GVHR的模型。并在体内观察了HLA-G二聚体对X-GVHR的影响，研究结果表明，HLA-G二聚体在本研究优化的纯化方法与有效剂量的方案下，未能观察到改善模型鼠的X-GVHR症状和延长其生存时间，即未表现出HLA-G二聚体具有抑制X-GVHR的作用。.鉴于HLA-G二聚体不能改善模型鼠的X-GVHR症状与延长其生存时间，本课题取消原计划中探讨可溶性HLA-G二聚体诱导T细胞耐受的体内作用机制研究计划，研究了银屑病患者HLA-G14bp、*0105N基因型分布对外周血单个核细胞sHLA-G最大释放量的影响，研究结果表明HLA-G14bp、*0105N基因型分布影响外周血单个核细胞sHLA-G最大释放量，并与银屑病关联。.本课题按年度计划基本完成了课题设计中各项任务，培养了博士生6名，硕士生5名，已资助发表文章3篇，并在随后两年内将发表SCI论文2篇，中文核心4篇（正在统计数据、成文中），申报专利一项（专利申报号为200910273098.7），但因本研究组博士生所发表论文有所披露，未能获批专利。