从"肾藏精"探讨补肾法动员胚胎干细胞对胃癌干细胞自我更新的作用

目的：补肾法调节干细胞和胃癌干细胞及改变表观遗传手段对肿瘤生物学特征的影响。.方法：观察胃癌干细胞和胚胎干细胞的生物学特性、补肾法对胃癌干细胞和胚胎干细胞的作用、肿瘤干细胞自我更新的差异基因表达及信号转导通路的变化。建立了生物学特性稳定的胃癌干细胞系，对胃癌干细胞和胚胎干细胞分离培养与鉴定及细胞融合试验；制备补肾中药六味地黄丸含药血清，检测其对胚胎干细胞及肿瘤干细胞自我更新的影响。.结果：1、肿瘤干细胞分选与生物学特性：采用ALDH1和侧群细胞两种方法分选肿瘤干细胞，发现胃癌干细胞具有自我更新的生物学特性，胃癌干细胞克隆形成数量和形成率高于对照组；胃癌干细胞具有致瘤性和耐药性，利血平拮抗后胃癌干细胞的比例下降不明显。2、胚胎干细胞对胃癌干细胞的作用：胃癌干细胞+胚胎干细胞组OD值与对照组比较，胚胎干细胞对胃癌干细胞生长具有抑制趋势。3、补肾法对胚胎干细胞增殖的影响：MTT法检测不同药物浓度、不同时间的补肾法对胃癌干细胞作用的OD值，给药48h含药血清浓度20%(3.935±0.289)、15%(2.57±0.798)、10%(2.323±0.184)、5%(2.221±0.991)，与空白组(0.069±7.34×10-3)相比，胚胎干细胞OD值升高(P<0.05），效应和作用时间呈量效关系。4、补肾法对胃癌干细胞的影响：MTT检测细胞生长抑制情况，胃癌干细胞+补肾药组5%(6.7±0.2)、10%(7.3±0.4)、15%(32.1±1.8)、20%(45.2±3.1)与对照组(3±0.2)比较，补肾药对胃癌干细胞具有抑制作用，效应和作用时间呈量效关系；克隆形成试验检测，当含药血清为20%时，胃癌干细胞克隆能力降低；RT-PCR检测基因表达发现，药物作用后不同基因表达量存在差异。5、肿瘤干细胞自我更新差异基因表达，ALDH1法检测胃癌干细胞，胃癌细胞中ALDH呈一定量表达升高，对维持干细胞的“干性”具有一定作用。利用基因芯片测定差异表达发现，补肾药作用胃癌干细胞后GAPDH、OCT4、Nanog、sox2基因表达呈不同程度下降趋势。.结论：补肾法具有促进胚胎干细胞增殖作用，胚胎干细胞对胃癌干细胞有增殖抑制；六味地黄丸对胃癌干细胞生长有抑制趋势，这可能与补肾药动员肾藏精扶助正气，调节肿瘤干细胞内环境，下调GAPDH、OCT4、Nanog、sox2基因表达相关。