P14-3-3对胁迫应答因子PSti-1的调控作用

多头绒泡菌的原质团是多核体细胞，只有细胞核和线粒体两种细胞器；但具有多细胞生物的耐胁迫能力，是研究细胞胁迫应答的好材料；也是研究细胞氧化与线粒体关系的好材料。为了解环境胁迫对多头绒泡菌的影响，我们检测了山梨醇、Cu2+、Cr3+和纳米TiO2对多头绒泡菌原质团生长的影响，发现低剂量上述胁迫可刺激多头绒泡菌生长，但超过临界剂量后都会抑制多头绒泡菌生长。我们还发现，纳米TiO2抑制多头绒泡菌生长时的ROS水平和GST表达水平高于刺激生长时的ROS水平和GST表达水平，而多头绒泡菌14-3-3、Sti-1和HSP70蛋白（P14-3-3、PSti-1和PHsp70）的表达只与应激有关，与纳米TiO2的胁迫剂量无关，说明上述3个蛋白都是胁迫应答蛋白。. 保守的14-3-3和Sti-1是两个与胁迫应答有关分子伴侣蛋白，但尚未看到两个蛋白相互配合调控胁迫应答的报导。本研究通过Q-PCR检测发现P14-3-3、PSti-1和actin的表达既受细胞周期调控，也受孢子形成调控。通过检测共表达的相互作用蛋白能激活酵母Y187报告基因LacZ的表达发现，P14-3-3与PSti-1、PHsp70、actin和GST间存在相互作用。Bmh1和Bmh2是酵母的两个14-3-3蛋白，其基因分别称作rad24和rad25。本研究发现，Bmh1与Sti-1间存在相互作用，但Bmh2与Sti-1间没有直接作用。利用酵母Y258，我们制备了基因rad24、rad25和sti1单缺失以及基因rad24/sti1和rad25/sti1双缺失的酵母，制备了sti1和psti1补救的酵母以及Bmh1、Bmh1和P14-3-3过表达的酵母，发现缺失sti1的酵母耐受高温、H2O2、NaCl和山梨醇胁迫的能力显著下降，补救sti1和psti1能恢复酵母的耐胁迫能力；缺失rad24或rad25可提高酵母的耐高温和H2O2胁迫的能力，但过表达Bmh1、Bmh1和P14-3-3对酵母的影响却与之相反；双缺失rad24/sti1会降低酵母耐受高温、H2O2和山梨醇胁迫的能力，但双缺失rad25/sti1却能提高酵母耐受高温、H2O2和山梨醇胁迫的能力。本研究还发现PHsp70和actin是P14-3-3和PSti-1共同作用的配体蛋白。此外，本研究还制备了3个P14-3-3的单克隆抗体。