Ag85a/IL-17重组耻垢分枝杆菌诱导抗IL-17自身抗体抑制哮喘气道炎症机制研究

支气管哮喘是目前最为关注的公共健康问题，影响全球数百万患者的健康。IL-17A被证实是哮喘发生发展的关键因子。阻断内源性IL-17A的致炎作用有望成为哮喘治疗的新靶点。以耻垢分枝杆菌作为载体菌，利用外源蛋白为IL-17A提供Th 细胞抗原结合表位，构建诱导抗IL-17A自身抗体疫苗用于防治哮喘，既有可能性又有必要性。.本研究拟构建重组耻垢分枝杆菌rMS-Ag85a-IL-17a，并利用rMS-Ag85a-IL-17a疫苗诱导抗IL-17身抗体的特性，将疫苗接种过敏性哮喘小鼠模型，探讨该疫苗抑制哮喘气道炎症的可能性及机制。.本课题成功构建pET-28a-Ag85a-IL-17a原核表达质粒，利用原核表达、蛋白纯化技术制备了重组蛋白Ag85A-IL-17A。通过构建哮喘小鼠模型发现，重组蛋白Ag85A-IL-17A显著降低了哮喘小鼠BALF中Th17型细胞因子以及Th2型细胞因子水平；降低免疫小鼠小气道周围的炎症以及BALF中总细胞数、嗜酸性粒细胞及中性粒细胞的数量；降低了体外培养的脾细胞IL-13+T细胞的数量；肺组织CXCL1和CCL2 mRNA的水平在重组蛋白Ag85A-IL-17A免疫组明显降低。证实重组蛋白Ag85A-IL-17A具有拮抗哮喘小鼠气道炎症的作用。.本课题以大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMFA42S为载体，在前期实验基础上，构建重组穿梭表达质粒pMFA42S-Ag85a-IL-17a，采用电转化技术构建表达融合蛋白Ag85A-IL-17A的重组耻垢分枝杆菌疫苗rMS-Ag85a-IL-17a，其经鼻腔黏膜免疫干预过敏性哮喘小鼠。实验结果提示，rMS-Ag85a-IL-17a可在体内诱导产生抗IL-17A自身抗体，降低IL-17A以及IL-6的表达水平，同时调节Th1/Th2免疫平衡，下调Eotaxin-1、 MIP-2等趋化因子的表达，从而有效抑制哮喘小鼠气道炎性细胞浸润和黏液分泌，减轻气道炎症反应。.本研究成功构建了能够体内诱导产生自身抗体的重组疫苗，证实了通过外源性蛋白提供Th细胞抗原表位，可诱导产生针对自身蛋白的抗体。构建的重组疫苗同时兼具有调节Th1/Th2免疫失衡及抑制IL-17A的功能，对嗜酸性粒细胞和中性粒细胞气道炎症均有抑制作用，为未来抗气道炎症的研究提供了一个新方向。