蛋白聚糖在牙本质疏水性粘接界面中的作用及机制研究

牙本质湿粘接技术中蛋白聚糖（PGs）与胶原纤维共同作为粘接基底，参与混合层的形成。目前蛋白聚糖对这一核心环节的作用机制，亟待进一步的实验研究。本项目通过免疫荧光双重标记技术结合激光共聚焦扫描显微镜观察技术确定牙本质内蛋白聚糖的分布；以硫酸软骨素酶C-ABC和胰蛋白酶消化去除糖胺聚糖侧链（GAG）和蛋白聚糖核心蛋白，场发射扫描电镜（Field emission scanning electron microscopy, FESEM）下观察去除蛋白聚糖前后的牙本质粘接基质的显微形态，对蛋白聚糖及胶原纤维的分布位置进行鉴定，验证酶对蛋白聚糖的去除效果，分析GAGs和PGs在维持胶原纤维空间结构和脱矿牙本质水合性能方面发挥的作用；以共聚焦拉曼光谱仪（CMRS）检测两种临床常用全酸蚀粘接剂Adper TM Single Bond 2 (SB2) 和Prime & Bond NT (PBNT) 中树脂单体在牙本质粘接基质中的渗透深度，研究蛋白聚糖对单体渗透的影响；微拉伸强度测试（micro-tensile bond test, µTBS）检测对比去除蛋白聚糖前后SB2 和PBNT的即刻粘接强度，以及通过机械应力疲劳（Mechanical Cycling MC）和冷热循环老化（Thermal Cycling）处理后的粘接强度，探讨蛋白聚糖对牙本质即刻粘接强度和粘接耐久性的影响；FESEM对比去除牙本质粘接基质中的蛋白聚糖前后粘接界面纳米渗漏的改变，探讨蛋白聚糖对混合层的形成及退变产生的作用。结果如下：①蛋白聚糖主要分布在管周牙本质和牙本质小管管腔；②蛋白聚糖侧链GAG显著提高粘接基底的水和性能，有效维持胶原纤维的三维空间形貌；③蛋白聚糖阻碍粘接剂中Bis-GMA、TEGDMA等大分子树脂单体在粘接基质中渗透；④去除蛋白聚糖可以提高全酸蚀系统SB2 和PBNT的即刻粘接强度和粘接耐久性⑤去除蛋白聚糖可以有效减少全酸蚀系统SB2 和PBNT的纳米渗漏。证实蛋白聚糖存在于人牙本质中，在牙本质湿粘接过程中结合大量的水分子，以水凝胶状分布于胶原纤维网，起到"分子筛"作用（molecular sieving），通过阻碍大分子树脂单体的渗透，影响混合层的形成质量、厚度、纳米渗漏，进而影响牙本质粘接强度和粘接耐久性。