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基于AVP-V2R-AQP2通路探讨大黄“泄热”的双通道机制
结题报告
批准号:
81904006
项目类别:
青年科学基金项目
资助金额:
20.0 万元
负责人:
姚锐
学科分类:
H3302.中西医结合临床基础
结题年份:
2022
批准年份:
2019
项目状态:
已结题
项目参与者:
--
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中文摘要
大黄泻下现“泄热”临床疗效,比照大黄“泻下通便、通下利尿”效应,创新性提出大黄“泄热”之“双通道(结肠与肾)”。AQP2是结肠和肾脏调节水液代谢重要因子,前期研究发现大黄泻下作用可能与降低AQP2表达有关。AVP是中枢发热负调介质,经下丘脑神经垂体束生成释放入血,研究发现AVP中枢和外周给药同样都有退热作用,AVP可通过调节V2受体作用于AQP2,同时AQP2调节可能有促进AVP的作用。然而AVP-V2R-AQP2是否参与体温调节及其机制如何目前尚不清楚,大黄泻下作用伴随的“泄热”疗效是否与AVP-V2R-AQP2有关?大黄不同成分(大黄酸/大黄素/大黄酚等)可否导致泄热部位(结肠/肾脏)差异?本研究拟采用阻断剂及激动剂,通过在体和离体实验,探究大黄是否通过AVP-V2R-AQP2通路发挥泄热作用;采用细胞荧光探针标记技术观测AQP2胞内分布与磷酸化水平,察验大黄效应成分与药效部位的关系。
英文摘要
According to the "purge heat” clinical efficacy due to "diarrhea" effect of rhubarb, and clinical manifestation of "laxative and diuresis”,we innovatively propose the mechanism of rhubarb “purge heat” effect through "dual channel" -colon and kidney.AQP2 is an important factor in the regulation of water and liquid metabolism in the colon and kidney. Previous studies have found that the diarrhea effect of rhubarb may be related to the reduction of AQP2 expression.As a negative mediator of body temperature regulation, AVP is released into the blood via hypothalamus neurohypophysis tract. Studies have found that both central and peripheral administration of AVP have antipyretic effects, and that AVP can act on AQP2 by regulating V2 receptors, and that AQP2 regulation may promote AVP.However, it is not clear whether AVP-V2R-AQP2 Signaling pathway is involved in temperature regulation. What is the mechanism of the " purge heat" effect of rhubarb that related to AVP-V2R-AQP2 Signaling pathway ?Can different components of rhubarb (emodin/emodin/emodin) cause differences in different tissue (colon/kidney)?In this study, blockers and agonists were used to explore the " purge heat" effect of rhubarb that related to AVP-V2R-AQP2 Signaling pathway through in vivo and in vitro experiments.Intracellular fluorescent probe labeling is used to observe AQP2 phosphorylation levels and intracellular distribution.Aims:①Verify the " dual channel " mechanism of rhubarb to purge heat by detecting the AQP2 expression caused by rhubarb and the relation with AVP-V2R-AQP2 Signaling pathway.②Discuss the relationship between rhubarb components and pharmacodynamic sites, and verify the characteristics of "dual channel" to purge heat efficiency of rhubarb.
大黄“泻下”呈现“泄热”的临床疗效,我们研究证实大黄对3种发热模型,即干酵母致热大鼠模型、阳明病肠热腑实证发热大鼠模型以及脂多糖(LPS)发热大鼠模型均有较好的退热作用,表现为降低发热参数以及调节下丘脑中枢发热介质,同时下调肾脏及结肠组织中水通道蛋白2(AQP2)的表达,从而使水的重吸收减少,产生经结肠“泻下”和经肾脏“利尿”的双通道作用,此结果与粪水含量与尿量结果一致,明确了大黄双通道“泄热”作用。为了进一步研究药效机制及物质基础,我们采用HPLC-UV检测大黄5种成分含量并通过LC-MS/MS比较正常组及发热模型组大鼠经大黄灌胃后血浆中3种成分药物动力学差异,对照药效学实验,明确大黄酸是大黄泄热的重要物质成分。随后,以大黄水煎液及大黄酸为研究对象,我们发现发热模型大鼠早期血清精氨酸加压素(AVP)水平持续升高,同时肾脏及结肠组织中AQP2表达增加且分布发生变化,主要为肾小管上皮细胞的管腔膜、集合管主细胞膜与基底膜以及结肠远端上皮细胞,V2R受体表达升高,结果表明发热模型大鼠AVP-V2R-AQP2信号通路被激活。经大黄/大黄酸干预后,血清AVP含量降低、肾脏与结肠组织中的AQP2表达显著降低,V2R受体表达降低,可见大黄/大黄酸抑制AVP-V2R-AQP2信号通路的过度激活。为了评估V2R受体的作用,我们给予V2受体促效剂ddAVP,结果发现大黄/大黄酸对V2R-AQP2信号通路的抑制作用被减弱,伴随抗氧化应激作用及抗炎作用被消减,提示大黄/大黄酸通过抑制V2R-AQP2信号通路减轻发热模型大鼠氧化应激反应与炎症水平。最后通过细胞实验印证了上述结果,通过以AVP诱导来源于人结肠腺癌的细胞系LoVo及来源于正常大鼠肾细胞的细胞系NRK细胞损伤实验中发现,在NRK细胞中,大黄酸可降低V2R-AQP2 信号通路并抑制炎症反应,在Lovo细胞中,大黄酸降低V2R-AQP2 信号通路伴随PKA介导的改变,该结果值得我们进一步的深入研究。本课题首次提出并验证大黄经肾脏与结肠泄热的“双通道”效应及部分机制,创新了中药药效理论,对大黄的临床应用与研发有具有一定指导意义。
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DOI:--
发表时间:2021
期刊:陕西中医
影响因子:--
作者:董怡;马静;余楠楠;王方圆;薛松妍;朱芳红;赵行行;储霞;姚锐
通讯作者:姚锐
DOI:--
发表时间:2021
期刊:时珍国医国药
影响因子:--
作者:姚锐;王常明;张璇;姜睿斌;董怡;李锋
通讯作者:李锋
DOI:--
发表时间:--
期刊:西部中医药
影响因子:--
作者:姚锐;刘超;张晓菊;宋楠楠;李锋
通讯作者:李锋
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