hTERT基因在人表皮干细胞中的表达与调控研究

用基因芯片技术、RT-PCR、Western blot、流式细胞检测和免疫组化及表皮干细胞体外分离培养方法，比较观察不同发育阶段人表皮干细胞hTERT基因与端粒酶活性表达特征，探讨它们与增殖相关基因差异表达的关系；构建hTERT和EGFP双基因共表达重组真核表达质粒，采用脂质体介导的基因转染方法将其导入人表皮干细胞中，RT-PCR、Western blot检测hTERT mRNA转录及其蛋白的表达情况，基因芯片技术筛选转染前后表皮干细胞差异表达基因，分析端粒酶活性重建对表皮干细胞基因表达谱的影响及与细胞增殖的关系。旨在初步阐明端粒酶活性的表达与重建在维持表皮干细胞生物学特性中的作用和规律，寻找调控表皮干细胞体外复制、扩增的开关，为进一步的基因修饰、单克隆筛选、细胞特异性表面标志物和分化机制研究、及获得皮肤组织工程标准种子细胞系奠定实验基础。