固醇反应元件结合蛋白－1c对非酒精性脂肪性肝病UCP2的转录调控研究

线粒体解偶联蛋白2（UCP2）与糖尿病、脑中风和脂肪肝等多种疾病有关，鉴于UCP2启动子区域存在固醇反应顺式元件（SRE），本课题试图通过复制高脂饮食非酒精性脂肪性肝炎大鼠模型，结合启动子研究技术，探讨固醇反应元件结合蛋白（SREBP-1c）对大鼠肝脏UCP2转录调控。.本课题首先通过构建pGL3-UCP2-Luc表达载体，进行了UCP2基因启动子删除等实验，结果证实,该区域启动子活性明显增强。继而采用胰岛素刺激H4IIE肝肿瘤细胞，发现固醇反应元件结合蛋白（SREBP-1c）蛋白和UCP2的mRNA水平明显增加及SREBP-1c与UCP2的启动子的结合，证实了SREBP-1c对大鼠UCP2的转录调控。.为了探讨SREBP-1c对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠肝脏UCP2转录调控作用，我们采用高脂饲料分别喂养SD雄性大鼠8，12和16周，复制NAFLD。结果表明模型组大鼠肝细胞发生明显脂肪变性和气球样变，并可见炎性细胞浸润和点状坏死；大鼠肝脏晚期糖基化终末产物及其受体（AGE/RAGE）蛋白水平升高及细胞凋亡增加；同时伴有血糖和胰岛素水平升高，糖耐量降低；血清三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白水平升高；提示非酒精性脂肪性肝炎大鼠的肝脏炎症可能与AGE/RAGE有关，肝脏炎症和细胞凋亡参与非酒精性脂肪性肝炎的形成。 通过提取NAFLD大鼠肝脏核蛋白和胞浆蛋白及RNA和染色质，采 用Western和RT-PCR方法检测大鼠肝脏UCP2和SREBP-1c蛋白及mRNA水平，结果表明，模型组大鼠肝脏SREBP-1c和UCP2蛋白水平升高，提示肝脏SREBP-1c和UCP2参与大鼠NAFLD的形成。采用EMSA和CHIP方法检测大鼠肝脏SREBP-1c蛋白和UCP2启动子的结合，结果表明，模型组大鼠肝脏SREBP-1c和UCP2启动子结合活性明显增强，证实SREBP-1c对非酒精性脂肪性肝炎大鼠UCP2的转录调控。为了探讨UCP2在脂性细胞凋亡中的作用，分别用油酸和软脂酸刺激过表达UCP2的肝肿瘤细胞，结果表明，UCP2对软脂酸诱导的脂毒性（细胞凋亡）具有保护作用。 .本课题揭示了SREBP在NAFLD的表达及对UCP2的转录调控，有助于阐明UCP2的分子调控机制及精细调控UCP2的表达这一科学问题，为临床NASH的预防和治疗提供实验依据和思路。