根虫瘟霉致病过程中基质特异性胞外蛋白酶诱导表达的分子机理

本项目拟以根虫瘟霉原始菌株及转寄主继代感染菌株为研究对象，以转寄主前后表达差异的基质特异性胞外蛋白酶为研究突破口。通过应用蛋白酶抑制剂对表达差异胞外蛋白酶类型的鉴定，寻找保守序列，设计并制备简并引物。同时构建原始菌株及转寄主菌株的cDNA文库，用PCR法扩增并克隆相关基因。随机引物法制备32P探针，并从文库中筛选获得全长基因。测序分析后，连接转化至酵母系统中表达并进行功能分析。此外结合Northern 印迹杂交分析和In-Gel蛋白酶分析技术验证根虫瘟霉菌株在不同培养条件及入侵寄主过程中相关基因诱导表达的差异，试图在分子水平上阐明虫霉胞外蛋白酶受寄主诱导表达的机理，揭示其毒力增强的奥秘。本项目的完成对了解虫霉遗传、变异及生物多样性，实现菌株遗传改良，培养高毒力菌株，充分开发昆虫病原真菌资源及生物技术在害虫生物防治中的潜力均有重要的指导意义。