恶性疟原虫酸性钙体的分离纯化及功能鉴定
批准号:
81171608
项目类别:
面上项目
资助金额:
58.0 万元
负责人:
郝文波
依托单位:
学科分类:
H2203.寄生虫与感染
结题年份:
2015
批准年份:
2011
项目状态:
已结题
项目参与者:
杨学习、陈瑶、高洋、李粉霞、刘雅娟、廖小青
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中文摘要
酸性钙体(Acidocalcisome)是一种富含钙、多聚磷酸、电子致密的酸性细胞器。该细胞器最先在锥虫中被发现和命名,其功能是储存能量,参与多聚磷酸代谢、维持细胞浆内钙离子浓度、pH值和渗透压的平衡。前期研究已发现恶性疟原虫 、伯氏疟原虫中有酸性钙体存在,但其具体结构和生物学功能尚不清楚。本研究拟对恶性疟原虫酸性钙体进行深入研究,旨在:1)建立恶性疟原虫裂殖子的酸性钙体的分离和纯化技术;2)对纯化的酸性钙体进行系统的生物学、生物化学、脂质和蛋白质组学分析,并构建该细胞器的膜蛋白以及细胞器内可溶性蛋白质图谱;最终,通过上述研究阐明恶性疟原虫酸性钙体的结构、生物学功能和代谢特点,为疟原虫的相关基础研究及探索新的抗疟药物靶点奠定基础。
英文摘要
酸性钙体(Acidocalcisome)是一种富含钙、多聚磷酸、电子致密的酸性细胞器。该细胞器最先在锥虫中被发现和命名,其功能是储存能量,参与多聚磷酸代谢、维持细胞浆内钙离子浓度、pH值和渗透压的平衡。前期研究已发现恶性疟原虫 、伯氏疟原虫中有酸性钙体存在,但其具体结构和生物学功能尚不清楚。本研究分别建立了采用碘克沙醇密度梯度分离纯化恶性疟原虫、伯氏疟原虫和弓形虫的酸性钙体的方法,并利用透射电镜观察、x-ray能谱分析、lc-ms/ms等方法对其形态学、化学组成、生物学活性及蛋白质组学等进行深入研究。三种病原体的酸性钙体均为大小不等的电子致密物质,主要由钙、磷、镁等元素组成。对分离纯化的不同病原体酸性钙体分别进行了液相串联质谱(lc-ms/ms)分析。恶性疟原虫鉴定获得283个蛋白质,其中77个为假想蛋白质,62个为恶性疟原虫保守蛋白,144个为已识别蛋白质,经系统生物信息学分析初步预测有17个蛋白质可能定位于恶性疟原虫酸性钙体。伯氏疟原虫鉴定得到308个相关蛋白,其中112个为假想蛋白质,80个疟原虫保守蛋白,116个为已识别蛋白质,预测6个蛋白质可能定位于酸性钙体。弓形虫共鉴定出267个蛋白质,其中172个蛋白带有注释,预测7个蛋白质可能定位于酸性钙体。对各病原体获得的各个带注释蛋白质的功能及定位都进行了分类。根据蛋白质组分析结果,分别选择一些重要蛋白进行定位和功能分析。采用合成肽作为免疫原的方法成功制备了酸性钙体的标志蛋白VP1及其它可能定位于酸性钙体蛋白的多抗和单抗并鉴定其特异性。免疫荧光共定位实验已证明5种弓形虫蛋白质可能定位于酸性钙体。克隆并原核表达纯化了弓形虫TgNHE的C末端序列,将纯化蛋白免疫兔子制备抗TgNHE1多克隆抗体,该多抗能显著降低弓形虫入侵宿主细胞的能力,推测该蛋白可能与弓形虫侵袭力有关。本研究首次绘制恶性疟原虫、伯氏疟原虫、弓形虫的酸性钙体蛋白质图谱,为相关病原体的基础研究及探索新的药物靶点奠定基础。本课题共发表论文8篇,其中sci收录2篇。申请发明专利4项。参加全国学术交流会议8人次。培养博士研究生1人,硕士研究生2人。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
A Novel Polyclonal Antiserum against Toxoplasma gondii Sodium Hydrogen Exchanger 1.
一种针对弓形虫弓形氢交换器1的新型多克隆抗血清1。
DOI:10.3347/kjp.2016.54.1.21
发表时间:2016-02
期刊:The Korean journal of parasitology
影响因子:--
作者:Xiao B;Kuang Z;Zhan Y;Chen D;Gao Y;Li M;Luo S;Hao W
通讯作者:Hao W
DOI:--
发表时间:2014
期刊:热带医学杂志
影响因子:--
作者:程莎莎;郝文波;罗树红;廖小青
通讯作者:廖小青
Generation and Identification of Peptide-Based Monoclonal Antibodies Against Vacuolar Proton Pyrophosphatase of Toxoplasma gondii
弓形虫液泡质子焦磷酸酶肽单克隆抗体的制备和鉴定
DOI:--
发表时间:2015
期刊:Monoclon Antib Immunodiagn Immunother
影响因子:--
作者:Li, Wei;Liao, Xiaoqing;Luo, Shuhong;Hao, Wenbo
通讯作者:Hao, Wenbo
DOI:--
发表时间:2013
期刊:国际医学寄生虫病杂志
影响因子:--
作者:程莎莎;郝文波
通讯作者:郝文波
DOI:--
发表时间:2015
期刊:中国人兽共患病学报
影响因子:--
作者:郝文波;肖斌;廖小青;罗树红
通讯作者:罗树红
ORFV靶向SHMT2抑制PDPK1稳定性诱导宿
主细胞自噬性凋亡的机制研究
- 批准号:--
- 项目类别:省市级项目
- 资助金额:10.0万元
- 批准年份:2025
- 负责人:郝文波
- 依托单位:
羊口疮病毒ORFV118蛋白调控宿主细胞凋亡的分子机制研究
- 批准号:31672536
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:61.0万元
- 批准年份:2016
- 负责人:郝文波
- 依托单位:
拮抗脑型疟PfEMP-1保守抗原表位鉴定及粘附阻断剂研制
- 批准号:30200238
- 项目类别:青年科学基金项目
- 资助金额:19.0万元
- 批准年份:2002
- 负责人:郝文波
- 依托单位:
国内基金
海外基金















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