微泡靶向传递siMDR1基因及化疗药物在睾丸肿瘤治疗中的应用

本课题构建携带多药耐药基因1（MDR1）特异性小干扰RNA的真核表达质粒pSEB-siMDR1，采用基因沉默的方法抑制血管内皮细胞中P-糖蛋白的表达和功能，从而促进化疗药物进入睾丸组织中。但高效定向的体内基因转染是研究的关键点，超声微泡的应用为实现体内靶向转染siMDR1基因提供了一种可靠的新方法。携带pSEB-siMDR1质粒的微泡，由静脉注入可通过循环到达睾丸，在超声作用下破坏微泡实现siMDR1小干扰RNA体内向睾丸毛细血管内皮细胞的靶向转染，抑制P-糖蛋白表达和功能，为化疗药物进入睾丸内有效杀灭肿瘤提供了条件，从而提高睾丸肿瘤治愈率。通过本课题的研究，获得如下结果： 1.重组pSEB-siMDR1真核表达质粒构建成功，能有效抑制MDR1基因和蛋白的表达。2.适合的超声强度和暴露时间能够明显促进质粒对细胞的转染，并不会对细胞存活产生明显的影响。超声与微泡造影剂同时存在的情况下，能显著提高pSEB-siMDR1质粒对L2RYC细胞的转染效率，转染后内源性MDR1 mRNA和P-糖蛋白的表达及功能被抑制，L2RYC对化疗药物的敏感性增加。3. 超声联合微泡能促进pSEB-siMDR1对大鼠睾丸毛细血管的转染，抑制P-糖蛋白的表达及其药泵功能，使化疗药物更容易进入睾丸组织内。4. 超声联合微泡靶向转染pSEB-siMDR1能够提高睾丸肿瘤的化疗效果，增加肿瘤细胞的死亡，使荷瘤鼠存活率提高。本研究应用超声微泡体内转染siMDR1基因逆转睾丸肿瘤耐药，提高化疗效果，在睾丸肿瘤治疗中将有着可观的前景和价值。