新疆鼠尾草通过miR-15a-5p/miR-223影响巨核细胞GPVI信号通路调控血小板聚集/抗血栓的机制研究
批准号:
82060771
项目类别:
地区科学基金项目
资助金额:
34.0 万元
负责人:
王新玲
依托单位:
学科分类:
民族药学
结题年份:
2024
批准年份:
2020
项目状态:
已结题
项目参与者:
王新玲
中文摘要
新疆鼠尾草作为新疆地方特色药材不仅具有抗菌消炎的作用,也具有抗血小板聚集的疗效。课题组前期多项药物研究和临床研究以及动物实验研究将新疆鼠尾草用于抗血栓/抗血小板聚集治疗均取得较好疗效。前期研究也证实了新疆鼠尾草主要含有水溶性酚酸类和脂溶性萜类化合物,且具有较强的抗氧化和抗血栓作用,并且提出具有抗血小板聚集作用的特征化合物结构依据,同时预实验也证明了新疆鼠尾草可以调控miR-15a-5p和miR-223的表达。因此课题组假设新疆鼠尾草通过miR-15a-5p和miR-223介导的GPVI信号通路调控αIIbβ3,降低血小板的聚集,同时通过动物实验和体外实验,明确新疆鼠尾草通过miR-15a-5p调控GPVI的五个相关基因,具有抗血栓的作用。本项目的完成将为中国新疆地方特色药材应用于抗血小板/抗血栓治疗提供分子生物学的依据。
英文摘要
As a local characteristic medicine, Salvia deserta Schang not only has antibacterial and anti-inflammatory effects, but also has an antiplatelet aggregation effect. A number of previous pharmaceutical, clinical and animal studies in our group have shown that Salvia deserta Schang has a good effect on antithrombotic/antiplatelet therapy. Previous studies have also confirmed that the water-soluble phenolic acids and lipid-soluble terpenoids mainly contained in Salvia deserta Schang have a strong antioxidation and antithrombotic effects, and proposed the structural basis for the anti-platelet aggregation effect. In addition, preliminary experiments proved that Salvia deserta Schang could regulate the expression levels of miR-15a-5p and miR-223. Therefore, we hypothesized that Salvia deserta Schang could reduce platelet aggregation by regulating αIIbβ3 via miR-15a-5p and miR-223-mediated GPVI signaling pathway. Meanwhile, animal experiments and in vitro experiments were conducted to determine the antithrombotic effects of Salvia deserta Schang and the five target genes regulated of miR-15a-5p -mediated GPVI signaling pathway. The establish of this project will provide a molecular biological basis for the application of Xinjiang local characteristic medicine in antiplatelet aggregation/antithrombotic therapy.
基于新疆鼠尾草乙酸乙酯部位(SDS-TTE)具有抗血栓/抗血小板聚集的疗效,同时对血栓大鼠模型血液中miR-223和miR-15a-5p有一定调控作用的研究基础,我们推测SDS-TTE可通过miR-223和miR-15a-5p介导的影响GPVI信号通路关键基因表达调控αIIbβ3活性,降低血小板聚集,达到抗血栓的作用。本项目获准实施后,首先优选出制备SDS-TTE的稳定工艺,并进行了药材质量控制;规范了FeCl3诱导大鼠血栓模型建模方法和SDS-TTE灌胃的操作规程,结果证明优选的工艺稳定;建立的血栓模型方法成功、稳定,SDS-TTE灌胃的操作规程合理;其次建立了稳定可行的从大鼠骨髓中提取分离、富集和鉴定巨核细胞的方法;在此基础上,首先研究SDS-TTE对血栓大鼠血浆中血栓形成标志物的水平和骨髓巨核细胞凋亡率的影响,结果发现SDS-TTE能下调血栓形成大鼠血栓形成标志物的水平,抑制骨髓巨核细胞的凋亡;同时研究发现SDS-TTE可抑制血栓模型大鼠及其巨核细胞miR-223的表达,促进miR-15a-5p的表达;下调了血栓形成大鼠和骨髓巨核细胞中靶基因P2Y12、GPⅥ和αⅡbβ3的mRNA和蛋白表达量,抑制了GPⅥ信号通路相关的关键基因FYN、LYN、MYLK、SRGN、PRKCQ和FCER1G 的mRNA表达;体内实验也发现SDS-TTE降低了ADP、胶原和凝血酶诱导的血小板聚集率;基于新疆鼠尾草抗菌消炎作用和特征化合物结构依据,抗血小板聚集作用可以降低很多炎症因子,本实验又对SDS-TTE灌胃入血后血清成分进行了分析,结合网络药理学整合体内外实验,结果发现SDS-TTE能抑制炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的水平,下调PI3K和AKT mRNA的表达,降低生化指标TC、HDL-C、TG、ALT和AST的水平,体外血小板聚集实验也表明SDS-TTE入血后的血清能抑制血小板的聚集。因此本项目从细胞水平、分子生物学水平、血清化学和动物血栓疾病模型的层面阐明新疆鼠尾草SDS-TTE可通过影响骨髓巨核细胞中 miRNAs的表达变化调控GPVI信号通路相关关键基因及其下游因子PI3K和AKT mRNA的表达,进而调节αⅡbβ3水平,影响血小板聚集的变化,从而调控血栓形成的作用机制。本项目的完成为新疆地方特色药材应用于抗血小板/抗血栓治疗提供了分子生物学依据。
国内基金
海外基金