LncRNA1819促进三阴性乳腺癌增殖和转移的功能及作用机制研究
批准号：
82060481
项目类别：
地区科学基金项目
资助金额：
35.0 万元
负责人：
李臻
依托单位：
学科分类：
肿瘤表观遗传
结题年份：
2024
批准年份：
2020
项目状态：
已结题
项目参与者：
李臻
项目摘要
结项摘要
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中文摘要
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，目前三阴性乳腺癌缺乏有效治疗靶点。已知KLF5是一个促进三阴性乳腺癌增殖、迁移、存活及细胞干性的关键转录因子，KLF5是否可以通过调控长非编码RNA（lncRNA）的表达进而影响乳腺癌发生发展目前知之甚少。我们前期发现在三阴性乳腺癌细胞中敲低KLF5，lncRNA1819表达明显下调，我们证明了lncRNA1819可以促进三阴性乳腺癌细胞的增殖和转移，其机制可能是促进CCND1转录进而上调细胞周期蛋白D1（CyclinD1）。我们假设：lncRNA1819通过上调CyclinD1促进三阴性乳腺癌细胞的增殖和转移，lncRNA1819是潜在生物标志物和治疗靶点。本研究旨在阐明KLF5促进lncRNA1819在三阴性乳腺癌中高表达以及lncRNA1819的功能和分子机制，进而为三阴性乳腺癌的治疗提供可能的新靶点。
英文摘要
Breast cancer is the most prevalent cancer among women. Currently, triple-negative breast cancer (TNBC) is a particularly aggressive form of breast cancer that lacks known targets for therapies, making it difficult to treat. KLF5 is known to be a key transcription factor that promotes cell proliferation, migration, survival and stemness in TNBC. However, whether KLF5 affects breast carcinogenesis by regulating the expression of long non-coding RNA (lncRNA) remains unknown. Our previous study found that KLF5 knockdown significantly inhibited the expression of lncRNA1819 in TNBC. We also demonstrated that lncRNA1819 promoted cell proliferation and metastasis of TNBC, and the mechanism may be up-regulating of Cyclin D1 by promoting CCND1 transcription. We hypothesize that lncRNA1819 promotes TNBC growth and metastasis through up-regulating Cyclin D1, and lncRNA1819 is a potential biomarker and therapeutic target. The purpose of this study is to prove that KLF5 promotes the high expression of lncRNA1819 and elucidate the function and molecular mechanism of lncRNA1819 in TNBC. Together, these findings will suggest lncRNA1819 as a possible new target for the treatment of TNBC.
基底型乳腺癌 (basal-like breast cancer，BLBC) 是一类恶性程度最高、预后较差的乳腺癌亚型。越来越多研究显示，长链非编码 RNA(lncRNA) 在肿瘤发生发展过程中发挥着关键作用。在基底型乳腺癌中，转录因子KLF5 在是一个重要的促癌蛋白。然而，目前关于 KLF5 和 lncRNA 相互调控的研究知之甚少。本研究揭示一个全新 lncRNA KPRT4在基底型乳腺癌细胞中的促癌功能：（1）我们首先在基底型乳腺癌细胞 HCC1806和HCC1937中敲低KLF5，然后通过RNA-seq数据分析，筛选到lncRNAKPRT4。另外，利用 RACE 技术，获得了 KPRT4 的全长 RNA 序列。（2）通过一系列体内及体外的功能获得和功能缺失实验，明确了 KPRT4 在基底型乳腺癌细胞中的促癌功能。（3）通过多个分子生物学实验解析了 KLF5 与 KPRT4 之间的正反馈调控机制，例如蛋白质免疫印迹实验、逆转录-实时定量 PCR 实验 、荧光素酶报告基因实验 、KRAB-dCas9 基因沉默技术、染色质免疫沉淀实验 、荧光原位杂交实验，RNA 免疫沉淀实验、RNA pull-down 实验、三联体捕获实验等。（4）机制方面，转录因子 KLF5 结合在 KPRT4 启动子的 BS1 和 BS2 处，促进KPRT4 在基底型乳腺癌细胞中高表达。反之，KPRT4 通过其 5′端与转录因子 YB-1 互作、3′端在 KLF5 基因启动子处形成 RNA-DNA-DNA 三联体结构，进而招募YB-1 到 KLF5 基因启动子，最后促进 KLF5 表达。KLF5 与 KPRT4 之间形成的正反馈转录调控环路进一步增强 KLF5 表达，加速了细胞增殖。（5）此外，KLF5抑制剂 870 和米非司酮同样对 KPRT4 的表达有着明显的抑制效果，而使用靶向KPRT4 的 ASO 治疗方案能有效抑制小鼠体内肿瘤生长。（6）最后，通过数据库分析以及临床样本检测，发现 YB-1、KLF5 和 KPRT4 在乳腺癌病人中的表达呈正相关关系。综上所述，该研究证实了 KPRT4 是基底型乳腺癌的一个重要促癌因子，并且 KLF5 和 KPRT4 之间形成一个正反馈调控环路，而干预该环路可能是治疗基底型乳腺癌的一个有效策略。
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