Ras-GTP酶激活蛋白RASAL2通过调控YAP1/TIAM1轴促进胰腺癌恶性进展的机制研究
批准号：
82103563
项目类别：
青年科学基金项目（C类）
资助金额：
30.0 万元
负责人：
岳阳阳
依托单位：
学科分类：
肿瘤复发与转移
结题年份：
2024
批准年份：
2021
项目状态：
已结题
项目参与者：
岳阳阳
项目摘要
结项摘要
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中文摘要
胰腺癌常伴有KRAS突变，对RAS家族成员的研究具有重要意义。课题组发现，KRAS突变背景下Ras-GTP酶激活蛋白RASAL2在胰腺癌中高表达且与不良预后相关，调节RASAL2表达可以改变其恶性生物学行为，进一步通过RNA-seq分析筛选得到了与RASAL2密切相关的Hippo通路和驱动肿瘤恶性进展的关键分子TIAM1，蛋白互作工具预测RASAL2和TIAM1存在直接结合作用。我们推测：RASAL2在胰腺癌中高表达，促进了YAP1的活性，YAP1进一步入核协同转录因子TEAD促进TIAM1的转录；另一方面，RASAL2与TIAM1蛋白直接结合，抑制了后者的泛素化降解，最终促进胰腺癌的恶性进展。为证实该假说，我们拟从临床资料、体外细胞、体内动物三个层次，采用RNA-seq、染色质免疫共沉淀、蛋白质免疫共沉淀等技术，深入解析RASAL2/YAP1/TIAM1轴在胰腺癌恶性进展中的作用。
英文摘要
Pancreatic cancer is usually charactered with KRAS mutation, and the research of RAS family members is quite significant. We previously found that Ras-GTPase-activating protein RASAL2 was upregulated in PDAC and was correlated with poor prognosis. Regulation of RASAL2 could change the malignant biological behavior. Moreover, RNA-seq analysis showed that the Hippo pathway related with RASAL2. Moreover, RASAL2 are realted with TIAM1 which could regulate tumor malignance. The protein predication analysis demonstrated that RASAL2 may interact with TIAM1 directly. Therefore, we hypothesis that high expression of RASAL2 in pancreatic cancer could promote the YAP1 activity, then YAP1 could translocate to nuclear to cooperate with transcription factor TEAD to promote the transcription of TIAM1. On the other hand, RASAL2 binded with TIAM1 in protein and suppressed the ubiquitination of the latter. Finally, the malignant progression was promoted. To prove the hypothesis, our studies will be performed in three levels of clinical data, cell biology in vitro, animals in vivo. A variety of biology technology including RNA-seq, ChIP, Co-IP and so on will be applied to deeply study the function of RASAL2/YAP1/TIAM1 axis in malignant progression of PDAC.
胰腺癌是一种恶性程度非常高的肿瘤， 超过50%的患者在诊断时就已经发生了远处转移，即使根治性手术的患者也容易早期复发转移。早发现，早诊断，早治疗对于改善胰腺癌患者预后尤为重要，而更加深入的研究胰腺癌的发生发展机制，寻找胰腺癌发生发展相关的特异性分子和关键分子机制，是提高胰腺癌的早期诊断率，开发更有效治疗手段的重要基础。RAS蛋白激活因子2（RASAL2）是RAS GTP酶激活蛋白家族的成员之一，RASAL2在肿瘤的恶性进展中发挥着重要作用，在不同肿瘤中作用方式的机制尚有争议，但是在胰腺癌中的研究未见相关报道。.我们利用公共数据库分析RASAL2在正常胰腺组织和胰腺肿瘤组织中的表达水平，并通过荧光实时定量PCR（qRT-PCR），蛋白免疫印迹（Western blot）和免疫组织化学染色的方法在胰腺癌细胞系和组织中加以验证。在敲低或者过表达RASAL2的胰腺癌细胞系中，通过MTT实验、平板克隆实验、流式细胞分析、划痕愈合实验、Transwell小室迁移与侵袭实验和动物体内检测RASAL2对于胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。通过转录组二代测序分析探究RASAL2影响胰腺癌细胞恶性行为的重要通路和关键分子，利用染色质免疫共沉淀（ChIP）探究转录调节作用，利用蛋白免疫共沉淀（Co-IP）和双重免疫荧光染色来研究蛋白之间的直接相互作用。.我们的研究发现RASAL2是胰腺癌中高表达的关键分子之一，其高表达与胰腺癌患者不良预后显著相关；敲低RASAL2可以抑制胰腺癌细胞的增殖、侵袭与转移；过表达RASAL2可以促进胰腺癌细胞恶性行为；RASAL2可以调控Hippo通路和TIAM1的表达，可以促进TIAM1的转录并抑制其蛋白降解；RASAL2 通过调节YAP1/TIAM1通路促进胰腺癌细胞的恶性行为。
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