SPOP/RIPK3介导的程序性坏死在肾癌舒尼替尼耐药中的机制和功能研究

背景：舒尼替尼作为晚期肾癌的一线治疗药物，其疗效被肿瘤耐药限制。耐药与癌细胞对调节性细胞死亡的抵抗有关，凋亡和坏死性凋亡是两种主要的细胞死亡模式。斑点型锌指蛋白（SPOP）在一些肿瘤中起重要作用，但其在TNFα介导的细胞死亡中的角色尚未被报道。.目的： 探究 SPOP 在TNFα刺激下对凋亡和坏死性凋亡的调控作用。进一步寻找 SPOP 及其调控基因差异表达显著的代表性癌种，并在该癌种中进一步证实上述机制。随后评估相关小分子药物在代表性癌种中的抗肿瘤效果。.方法： 首先在MEF细胞敲除SPOP或RIPK3，使用不同诱导剂、抑制剂或RIPK3敲除以阻断相关通路，利用CCK-8、蛋白印迹和免疫共沉淀检测细胞活力、凋亡和坏死性凋亡标志物及功能性复合物的变化。同时，采用突变质粒转染和免疫共沉淀等探究具体的调控机制。然后，通过泛癌数据分析筛选出SPOP/RIPK1/RIPK3通路异常表达的癌种。最后，研究SM164与舒尼替尼联合使用对肾癌细胞的敏感性影响，并通过裸鼠皮下瘤模型评估其体内抗肿瘤效果。.结果：SPOP 缺失抑制凋亡和引起坏死性凋亡， SPOP 介导 RIPK3 的泛素化并抑制 RIPK1 的泛素化，促进复合体 IIb 的形成。RIPK3 很可能与 SPOP 的 MATH 结构域结合，并通过 E3 泛素连接酶被泛素化。 泛癌分析筛选出肾透明细胞癌（KIRC） 作为高表达 SPOP 和RIPK1 的癌种代表。 在 KIRC 中， SPOP 与 RIPK1/RIPK3 的相互作用仍然存在，且SPOP 的 mRNA 水平可以作为 KIRC 的独立预后标志物。在体内外试验中，SM164可以 RIPK1 依赖性的方式增加肾癌细胞系以及相应皮下瘤对舒尼替尼的敏感性，诱导肿瘤细胞凋亡，增强舒尼替尼的抗肿瘤效果。染色结果未观察到明显的心、肝、肾的药物毒性表现。.结论：SPOP 与 RIPK1 和 RIPK3 相互结合，抑制 RIPK1的泛素化并促进 RIPK3的泛素化，从而促进凋亡而抑制坏死性凋亡。 肾透明细胞癌可以作为高表达 SPOP 和RIPK1 的代表性肿瘤且在 KIRC 中 SPOP 调控 RIPK1/RIPK3 机制仍存在。SPOP 的mRNA 水平可以作为 KIRC 的独立预后标志。 SM164 可以以 RIPK1 依赖性的方式在体内和体外促进舒尼替尼的抗肿瘤作用。