牛支原体感染促进牛病毒性腹泻病毒感染机制的研究
批准号:
32060790
项目类别:
地区科学基金项目
资助金额:
34.0 万元
负责人:
郝永清
依托单位:
学科分类:
兽医细菌及其他微生物学
结题年份:
2024
批准年份:
2020
项目状态:
已结题
项目参与者:
郝永清
中文摘要
犊牛肺炎多由细菌与病毒混合感染引起,造成奶牛养殖业巨大经济损失,而相关研究极少。本团队在前期研究中发现,用灭活牛支原体疫苗免疫试验犊牛,可以显著降低犊牛肺炎发病率。基于此,我们针对和BVDV在犊牛肺炎发病过程中的可能协同作用提出两个假说:1)M. bovis感染易感染细胞后,有利于BVDV黏附,入侵细胞和胞内复制。2)M. bovis感染易感动物后,有利于BVDV入侵机体,分布和定植;促进感染部位组织因子分泌,加剧病理损伤。本研究拟用定量PCR监测BVDV在组织内的分布和定量,过氧化物酶单层细胞实验和ELISA监测M. bovis和BVDV抗体水平,组织病理学评分方法评定M. bovis促进BVDV感染造成病理损伤等方法,探索M. bovis与BVDV在体内、外协同感染的主要途径。本研究为揭示混合感染中细菌和病毒协同作用机制奠定基础,为治疗牛支原体肺炎提供新思路。
英文摘要
Calf pneumonia is mainly caused by the mixed infection of bacteria and virus, which causes huge economic loss in the dairy industry, but the related research is very few. Our team found that the incidence rate of calf pneumonia was significantly reduced by using the Mycoplasma vaccine vaccine. Based on this, we put forward two hypotheses about the possible synergistic effect of M. bovis and BVDV in the process of calf pneumonia: 1) M. bovis is beneficial to BVDV adhesion, invasion and intracellular replication after infecting susceptible cells. 2) After M. bovis infects susceptible animals, it is beneficial for BVDV to invade, distribute and colonize the body, promote the secretion of tissue factors at the infected site and aggravate the pathological damage. In this study, quantitative PCR was used to monitor the distribution and quantification of BVDV in tissues, peroxidase monolayer cell experiment and ELISA were used to monitor the antibody levels of M. bovis and BVDV, histopathological evaluation method was used to evaluate the promotion of M. bovis to BVDV infection and the pathological damage, and the main ways of M. bovis and BVDV co infection in vivo and in vitro were explored. This study laid a foundation for revealing the synergistic mechanism of bacteria and virus in mixed infection, and provided a new idea for the treatment of Mycoplasma bovis pneumonia.
本项目在2018年2024年间对638头份有呼吸道疾病症状的肉牛和奶牛鼻拭子进行PCR、RT-PCR检测,结果显示:M.bovis是核酸阳性率最高的病原(29.94%),病毒性病原中BVDV核酸阳性率最高(27.74%),二者的混合阳性率高达12.85%。在一个有根除BVDV计划的牛场中,分离到5株NCP型BVDV,1株CP型BVDV命名为HH839株,并通过病毒滴度测定、电镜、血清中和实验、qPCR、复制动力学测定、全基因组测序和遗传进化分析等方法,确定了该毒株的生物学特性。以新西兰白兔为试验对象,研究CP型、NCP型BVDV的致病性,通过临床症状观察,剖检观察,鼻肛门拭子及各脏器RT-PCR鉴定,组织病理学观察等方法,研究新西兰白兔作为BVDV感染模型的适用性。结果显示,通过耳缘静脉注射的方式人工感染白兔后,不同生物型BVDV对新西兰白兔可造成不同程度的致病性。随后又以新西兰白兔为模型探究M.bovis与BVDV混合感染对机体的致病作用,结果发现混合感染能够促进M.bovis和BVDV在上、下呼吸道的定植,并加重M.bovis对上、下呼吸道造成的病理损伤。此外,混合感染后机体对M.bovis和BVDV的体液免疫应答增强,加重了M.bovis造成的针对细胞免疫的免疫抑制。选择MDBK细胞和EBTr细胞作为细胞模型,从细胞层面探究了BVDV和M.bovis两种病原在细胞粘附能力上是否互相影响,结果显示:M.bovis在BVDV+的MDBK细胞粘附量与BVDV的感染时间和接种量呈正相关,M.bovis对BVDV+的EBTr细胞的粘附量与BVDV感染时间呈正相关,当BVDV接种量为0.74×107 TCID50时M.bovis的粘附量最大;BVDV对MDBK细胞和EBTr细胞的粘附能力与细胞是否有M.bovis感染无关。通过RNA-Seq方法探究了M.bovis和BVDV分别单独、混合感染EBTr细胞2 h、12 h、24 h、48 h后细胞转录水平的变化情况,结果显示:混合感染后EBTr细胞的免疫相关基因表达上调;混合感染2 h~24 h细胞骨架、紧密连接相关基因表达下调,细胞膜通透性发生改变,更利于病原的粘附和入侵;M.bovis与BVDV混合感染EBTr细胞并培养48 h后,EBTr细胞内的代谢网络发生变化抑制了BVDV的复制和M.bovis的繁殖。
基于乳腺上皮细胞FcRn胞吞转运途径的金黄色葡萄球菌多价毒力因子疫苗设计及其诱导免疫应答效果的研究
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批准号:31460664
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项目类别:地区科学基金项目
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资助金额:52.0万元
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批准年份:2014
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负责人:郝永清
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依托单位:
以奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌黏附素为靶位的生物技术疫苗的基础研究
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批准号:30760183
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项目类别:地区科学基金项目
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资助金额:17.0万元
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批准年份:2007
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负责人:郝永清
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依托单位:
国内基金
海外基金