麦拓莱霉素合成基因簇的序列测定及功能分析

构建麦拓莱霉素生产菌株的基因文库，利用已克隆的基因为探针，调取合成麦拓莱霉素的全部基因，测序后进行生物信息学分析，通过与已测序的其它聚酮合酶基因进行比较，了解抗生素合成基因簇的结构与功能，推断抗生素的合成途径及调节机制；然后根据同源交换原理，利用质粒pKC1139构建阻断麦拓莱霉素合成基因簇不同功能元件的突变株，经突变恢复实验验证后，应用液质联用和气质联用检测突变菌株中的抗生素合成中间产物，比较在不同位点阻断的突变株的代谢产物，分析不同功能元件的功能，推断抗生素的合成途径；另外，将麦拓莱霉素合成基因簇的一个功能元件或几个功能元件基因与硫脂酶基因连接后在变铅青链霉菌中表达，应用液质联用和气质联用比较分析不同表达体系的产物，确定这些功能元件的功能。通过以上研究，逐步确定麦拓莱霉素合成基因簇的各组成单位的功能并推断麦拓莱霉素的合成途径，为了解抗生素的合成调控机制及定向选育高产菌株奠定基础。