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应用转基因斑马鱼研究同源盒基因HOXB4在造血干细胞发育调控中的分子机制
结题报告
批准号:
30960412
项目类别:
地区科学基金项目
资助金额:
24.0 万元
负责人:
何志旭
依托单位:
学科分类:
H0813.造血干细胞移植与并发症
结题年份:
2012
批准年份:
2009
项目状态:
已结题
项目参与者:
舒莉萍、朱晓萍、米蔷、周婷、王磊、许威、丁可军、许键伟、扬燕
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中文摘要
造血干细胞(HSC)移植是临床治疗血液系统疾病、实体瘤、免疫缺陷病等疾病的重要措施。其供体来源十分缺乏,严重制约了HSC移植的应用。扩增HSC 是移植治疗的一个重大挑战,如何使HSC在体内外扩增同时保持自我更新特性更是一个亟待解决的难题。hoxb4 基因是造血细胞分化早期的重要调控因子, hoxb4 蛋白目前被认为是最有潜力的干细胞扩增工具之一。因此,本课题利用斑马鱼独特生物学和遗传学优势,即胚胎体外发育而且透明,可直接动态监测造血发育全过程,便于进行细胞生物学研究,造血调控网络与人类高度保守等特点,遂建立可示踪的HSC自我更新的斑马鱼模型,在斑马鱼体内时-空特异性过表达hoxb4基因,进一步探讨hoxb4基因在HSC发育和自我更新中的功能,阐明其可能的机制,以期推动对HSC自我更新的全面认识,为下一步进行活体内高通量候选药物筛选提供动物模型,并为人类疾病斑马鱼模型的构建和研究提供参考。
英文摘要
本项目2010年立项,我们按照合同约定的研究内容以及基金委的管理规定开展研究工作,经过3年的努力工作,顺利完成各项研究计划,并按年度提交了进度报告,现将研究工作概要总结如下:. 本研究通过将新发现的一个造血干细胞关键调控分子-Hoxb4 基因导入到模式生物斑马鱼体内,观察在造血细胞分化早期该基因的重要调控作用,为寻找具有开发价值的造血干细胞增殖药物提供理论依据。研究利用Cre-LoxP系统,通过斑马鱼成血成血管共同前体细胞的特异性启动子lmo2驱动Hoxb4,结合EGFP荧光标记技术,建立可示踪的有组织特异性的异位表达Hoxb4的转基因系。通过实时荧光观察、基因组测序、斑马鱼全胚胎原位杂交和western blot的方法,鉴定了组织特异性转基因系;通过WISH和real-time PCR的方法对斑马鱼造血发育中重要的转录因子的mRNA进行检测,从而进行表型分析和筛选。分别收集各组18-48hpf 多个时相点的胚胎,用flash、irx5a、p21、Rap1和cdh5的反义mRNA探针进行全胚胎原位杂交,观察其表达情况。最后,通过流式细胞分选技术分选对照组和实验组36hpf斑马鱼胚胎中含绿色荧光标记的细胞,提取RNA,再进行半定量RT-PCR比较flash、irx5a、p21、Rap1和cdh5基因含量差别。. 本研究在国际上首次成功地建立2个时-空特异性过表达Hoxb4基因的转基因斑马鱼系;在活体上发现Hoxb4在成血成血管共同前体细胞中异位表达后,可增加和延长斑马鱼原始造血过程中HSC的自我更新能力,同时HSC的分化能力未见明显变化。同时,提示在斑马鱼胚胎早期造血发育过程中Rap1和cdh5基因可能作为Hoxb4的下游靶基因共同参与调节造血干细胞的增殖发育。
期刊论文列表
专著列表
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专利列表
DOI:--
发表时间:--
期刊:第三军医大学学报
影响因子:--
作者:丁可军;舒莉萍;何志旭;许威;姬牧远;杨小燕;
通讯作者:
DOI:--
发表时间:--
期刊:浙江大学学报(医学版)
影响因子:--
作者:舒莉萍;MA Jian-juan;LI Tao;YE Zhi-xu;何志旭;姚冬静;马健娟;李涛;叶芝旭;SHU Li-ping;HE Zhi-xu;YAO Dong-jing
通讯作者:YAO Dong-jing
DOI:--
发表时间:--
期刊:第二军医大学学报
影响因子:--
作者:姚冬静;MA Jian-juan;LI Tao;HUANG Hui-min;舒莉萍;何志旭;马建娟;李涛;黄惠敏;YAO Dong-jing;SHU Li-ping;HE Zhi-xu
通讯作者:HE Zhi-xu
DOI:--
发表时间:2010
期刊:第三军医大学学报
影响因子:--
作者:丁可军;何志旭;舒莉萍;许威;姬牧远;杨小燕
通讯作者:杨小燕
Ectopic expression of Hoxb4 in hemangioblasts promotes hematopoietic development in zebrafish early embryogenesis
成血管细胞中Hoxb4的异位表达促进斑马鱼早期胚胎发生中的造血发育
DOI:--
发表时间:--
期刊:EXPER HEMATO
影响因子:--
作者:舒莉萍;周婷;邓敏;董梅;陈漪;付艳芳;金怡;刘廷析;何志旭
通讯作者:何志旭
脐带间充质干细胞运载呼肠孤病毒对急性髓系白血病细胞的溶瘤效应及机制探讨
  • 批准号:
    81871313
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    57.0万元
  • 批准年份:
    2018
  • 负责人:
    何志旭
  • 依托单位:
G6PD转基因斑马鱼模型的建立及其G6PD缺陷突变型酶与红细胞发育的分子研究
  • 批准号:
    31360285
  • 项目类别:
    地区科学基金项目
  • 资助金额:
    60.0万元
  • 批准年份:
    2013
  • 负责人:
    何志旭
  • 依托单位:
自身骨髓间充质干细胞联合VEGF基因治疗肺动脉高压的实验研究
  • 批准号:
    30560159
  • 项目类别:
    地区科学基金项目
  • 资助金额:
    21.0万元
  • 批准年份:
    2005
  • 负责人:
    何志旭
  • 依托单位:
国内基金
海外基金