Quantitative ESI-TOF analysis of macromolecular assembly kinetics.
Quantitative ESI-TOF analysis of macromolecular assembly kinetics.
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DOI：
10.1021/ac8020505
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发表时间：
2008-12-15
影响因子：
7.4
通讯作者：
Williamson, James R.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Bunner, Anne E.;Trauger, Sunia A.;Siuzdak, Gary;Williamson, James R.
大肠杆菌小（30S）核糖体亚基是研究体外自组装的一个特别具有良好特征的模型系统。先前开发的脉冲追踪定量质谱（PC/QMS）方法用于测量体外30S组装动力学，但信号噪声较差，无法观察到一些核糖体蛋白。我们开发了一种改进的基于LC-MS的方法，用于同位素标记的色氨酸的定量ESI-TOF分析。报告了20种核糖体蛋白中18种的结合率，蛋白质S2和S21在结合和非结合状态之间的交换阻止了它们结合动力学的测量。报道了3'结构域蛋白S7和S9的多相动力学，支持利用多个平行途径的组装机制。这种定量ESI-TOF方法应该广泛应用于研究其他大分子复合物的组装，以及一般的定量蛋白质组学实验。
The E. coli small (30S) ribosomal subunit is a particularly well-characterized model system for studying in vitro self-assembly. A previously developed pulse-chase monitored by quantitative mass spectrometry (PC/QMS) approach to measuring kinetics of in vitro 30S assembly suffered from poor signal-to-noise and was unable to observe some ribosomal proteins. We have developed an improved LC-MS based method using quantitative ESI-TOF analysis of isotope-labeled tryptic peptides. Binding rates for 18 of the 20 ribosomal proteins are reported, and exchange of proteins S2 and S21 between bound and unbound states prevented measurement of their binding kinetics. Multiphasic kinetics of 3' domain proteins S7 and S9 are reported, which support an assembly mechanism that utilizes multiple parallel pathways. This quantitative ESI-TOF approach should be widely applicable to study the assembly of other macromolecular complexes, and to quantitative proteomics experiments in general.
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影响因子：
5.6
作者：
Recht, MI;Williamson, JR
通讯作者：
Williamson, JR
DOI：
10.1073/pnas.91.17.7884
发表时间：
1994-08-16
影响因子：
11.1
作者：
SAMAHA, RR;OBRIEN, B;NOLLER, HF
通讯作者：
NOLLER, HF
影响因子：
7.4
作者：
Sperling, Edit;Bunner, Anne E.;Williamson, James R.
通讯作者：
Williamson, James R.
DOI：
10.1007/bf00455113
发表时间：
1977-01-01
期刊：
MOLECULAR AND GENERAL GENETICS
影响因子：
--
作者：
SUBRAMANIAN, AR;VANDUIN, J
通讯作者：
VANDUIN, J
DOI：
10.1111/j.1432-1033.1975.tb02275.x
发表时间：
1975-01-01
期刊：
EUROPEAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY
影响因子：
--
作者：
ULBRICH, B;NIERHAUS, KH
通讯作者：
NIERHAUS, KH