The Role of the C-terminal Domain of IB in Protein Degradation and Stabilization (*)
The Role of the C-terminal Domain of IB in Protein Degradation and Stabilization (*)
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IB C 末端结构域在蛋白质降解和稳定中的作用 (*)
DOI：
--
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发表时间：
1996
影响因子：
4.8
通讯作者：
J. Hiscott
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
P. Beauparlant;R. Lin;J. Hiscott
在本研究中，在四环素应答启动子的控制下，在NIH3T3细胞中检测了IκBαC末端在NF-κB/IκBα调控中的作用，该细胞可诱导表达野生型或突变的人IκBα蛋白。缺失研究表明，IκBαΔ3中缺失的C末端30个氨基酸(氨基酸(AA)2 88~aa317)包括大部分PEST结构域，是IκBα功能所必需的。然而，AA261~317或AA269~317(分别为IκBαΔ1和IκBαΔ2)的缺失在体外缺乏解离NF-κB/DNA复合体的能力，也不能抑制NF-κB依赖的转录。此外，IκBαΔ1和IκBαΔ2突变体对诱导剂介导的降解具有抗性。在蛋白质合成抑制剂存在的情况下对IκBα缺失的分析表明，在不受刺激的情况下，IκBαΔ1和IκBαΔ2的半衰期比野生型IκBα短4倍，免疫共沉淀法测得IκBαΔ1和IκBαΔ2与p65的相互作用在体内显著降低。有趣的是，阻断诱导剂介导的IκBα降解的蛋白酶抑制剂也稳定了IκBαΔ1和IκBαΔ2的周转。基于这些研究，我们认为在没有刺激的情况下，AA269和287之间的C末端结构域可能起到保护IκBα免受结构性蛋白酶活性的作用。
In the present study, the role of the IκBα C terminus in NF-κB/IκBα regulation was examined in NIH 3T3 cells engineered to inducibly express wild type or mutated human IκBα proteins under the control of the tetracycline responsive promoter. Deletion studies demonstrated that the last C-terminal 30 amino acids (amino acids (aa) 288 to aa 317, deleted in IκBαΔ3), including most of the PEST domain, were dispensible for IκBα function. However, deletions from aa 261 to 317 or aa 269 to 317 (IκBαΔ1 and IκBαΔ2 respectively), lacked the ability to dissociate NF-κB/DNA complexes in vitro and were unable to inhibit NF-κB dependent transcription. Moreover, IκBαΔ1 and IκBαΔ2 mutants were resistant to inducer-mediated degradation. Analysis of IκBα deletions in the presence of protein synthesis inhibitors revealed that, independently of stimulation, IκBαΔ1 and IκBαΔ2 had a half-life four times shorter than wild type IκBα and the interaction of IκBαΔ1 and IκBαΔ2 with p65 was dramatically decreased in vivo as measured by co-immunoprecipitation. Interestingly, protease inhibitors which block inducer-mediated degradation of IκBα also stabilized the turnover of IκBαΔ1 and IκBαΔ2. Based on these studies, we propose that in the absence of stimulation, the C-terminal domain between aa 269 and 287 may play a role to protect IκBα from a constitutive protease activity.
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纯化的 I kappa B-beta 在去磷酸化后失活。
DOI：
--
发表时间：
1992
期刊：
The Journal of biological chemistry
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作者：
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通讯作者：
Baeuerle,PA
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ROGERS, S;WELLS, R;RECHSTEINER, M
通讯作者：
RECHSTEINER, M
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